본문 바로가기
HOME> 논문 > 논문 검색상세

학위논문 상세정보

Characterization of helicobacter pylori alkyl hydroperoxide reductase(AhpC) 원문보기

  • 저자

    김도수

  • 학위수여기관

    Graduate School, Gyeongsang National University

  • 학위구분

    국내박사

  • 학과

    Department of Neurobiology

  • 지도교수

  • 발행년도

    2004

  • 총페이지

    43p.

  • 키워드

    AhpC Neurobiology helicobacter pylori alkyl hydroperoxide reductase;

  • 언어

    eng

  • 원문 URL

    http://www.riss.kr/link?id=T10059994&outLink=K  

  • 초록

    Helicobacter pylori는 1983 년에 Warren과 Mashall이 위염환자에서 처음으로 분리함으로써 동정되었다. 이 세균이 특징은 그람음성 만곡형 간균이며 미호기성으로 B형 유문부의 원인 균으로 위십이지장 궤양과 위암발생의 일차적인 결정인자로 세계보건기구(WTO)에서 1994년 이 세균을 위암의 제1종 발암원(Group I carcinogen)으로 규정하였다. 대부분의 세균은 산소의 대사중 발생하는 발생기 산소를 중화하는 catalase 및 superoxide dismutase 뿐만 아니라 alkylhydroperoxide reductase (AhpC)라는 효소를 보유하고 있다. H. pylori의 경우 AhpC 유전자가 생존에 필수 인자임을 확인 하였다. 이 유전자가 결손된 변이주는 생성되지 않는다. 특히 AhpC는 숙주의 방어기능의 일환으로 작용하는 염증반응의 결과물인 활성산소의 살균효과로부터 H. pylori를 효과적으로 방어할 것으로 추정된다. 따라서 H. pylori AhpC의 생화학적, 효소학적 성상은 이 세균의 병리학적 생리학적 성상을 설명하는데 중요한 자료가 될 것이다. 그리하여 본 연구에서는 H. pylori AhpC를 E. coli에서 발현시키고 정제하여 recombinant H. pylori AhpC의 효소학적 특성 및 생화학적 특성을 규명하고자 하였다. 유전자 재조합기술을 이용하여 AhpC 유전자를 대장균 내에서 과발현시킨 AhpC 단백질을 파쇄한 상등액에서 니켈 친화 크로마토그래피로 분리 하였다. AhpC의 분자량을 알기 위하여 SDS-PAGE를 실시한 결과 분자량은 26 kDa으로 확인되었다. 이 단백질량의 효소작용은 ferrithiocyanate 방법을 이용하여 측정하였다. AhpC 효소활성의 최적 pH와 온도는 각각 8.0-8.5와 25℃이었다. H. pylori AhpC와 Campylobacter jejuni, Salmonella typhimurium 및 Bacillus subtilis의 상동효소의 아미노산 서열을 비교한 결과 49번 및 169번의 cysteine이 보존되어 있음을 확인할 수 있었다. wild type AhpC가 이들 잔기를 serine으로변이시킨 과 변이 AhpC 단백질을 Lineweaver-Burk plot (double reciprocal plot)식을 이용하여 Km과 Vmax값을 측정 결과 wild type의 Km 과 Vmax는 0.308±0.059와 0.532±0.067, Cys49S는 0.29±0.002와 0.899±0.132, Cys169S는 0.623±0.064와 0.263±0.046 그리고 Cys49S, 168S 이중 변이효소이었고 0.55±0.062와 0.247±0.032이었다. Kcat값은 wild AhpC의 Kcat값은 66.48±0.139이었고 Cys169S는 30.24±5.67이었다. 그리고 Cys49S, 169S는 28.79±3.89이었다. 이러한 자료를 미루어 보아 49번 cysteine은 dimer형성에 중요한 역할을 하였고 활성에는 169는 효소활성에 관여하였다. 본연구의 결과로 미루어 보아 H. pylori AhpC는 활성산소를 중화시키는 기능을 하는 인자로 결론지을 수 있었다.


 활용도 분석

  • 상세보기

    amChart 영역
  • 원문보기

    amChart 영역