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식물전사조절 유전자의 기능유전체 연구를 위한 애기장대 전사조절인자 ORFeome의 구축과 분석 원문보기
Construction of arabidopsis transcription factor ORFeome for functional characterization of regulatory protein families using high-throughput approaches

  • 저자

    김혜진

  • 학위수여기관

    경상대학교

  • 학위구분

    국내석사

  • 학과

    응용생명과학부

  • 지도교수

  • 발행년도

    2004

  • 총페이지

    vi, 59장

  • 키워드

    식물전사조절 기능유전체 연구 애기장대 ORFeome;

  • 언어

    eng

  • 원문 URL

    http://www.riss.kr/link?id=T10060048&outLink=K  

  • 초록

    전사 조절 인자는 식물에서 다양한 성장 또는 발달 과정에서 중요한 역할을 한다. 최근 모델 식물인 애기장대의 유전체 구조가 밝혀짐에 따라 그 기능을 대단위적으로 규명하기 위한 기능 유전체 연구의 필요성이 높아지게 되었다. 전사 조절의 복잡한 기작을 이해하기 위해서는 전사 조절 인자들 간의 상호 작용을 유전체 수준에서 분석하는 것이 필요하다. Arabidopsis Genome의 annotation과 전사 조절 인자의 open reading frame의 기능적인 특성을 분석하기 위해 우리는 1,450개의 transcription factor의 protein-encoding reading frame을 computer 분석에 의해 예상 하였고 이들 ORFs중 약 1,100개 의 ORFs를 클론 하였다. Transcription factor ORF- eome를 cloning 하기 위해서 강력한 recombinational cloning (RC) system인 Gateway system을 이용하였다. Gateway system은 제한효소의 절단과 ligase에 의한 접합 과정이 필요 없는 효율적인 cloning방법으로서 reading frame이 정확하게 삽입 되고 원하는 target vector에 한 단계로 cloning 되는 방법이다. 우리는 정확한 reading frame을 가진 약 1100개의 transcription factor ORF -eome (TF ORFome)으로 된 yeast two-hybrid screen용 expression library를 구축하였다. 본 연구에서는 yeast AD-ORFeome library를 이용하여 특정 한 단백질과 결합 하는 단백질들을 분리하였고, 그 결과 이러한 방법이 흥미로운 조절 단백질을 분리해내는데 유용한 도구로 작용 한다는 것을 확인 할 수 있었다. Arabidopsis에서 광주기성 개화 조절에 아주 중요한 역할을 하고 있는 CONSTANS의 분자적인 작용기작은 규명되지 않았다. 그래서 우리는 CO와 결합하는 조절 단백질들을 분리하기 위해 TF ORFeome library 로부터 yeast two-hybrid screen을 수행하여 24종의 CO-interacting protein을 분리하였다. 이 단백질들은 CO와 결합하여 개화를 조절하는 역할을 할 것으로 추측 되어진다. 상기의 결과로 미루어 볼 때 본 연구는 식물 전사 조절 인자들 간의 전사 조절 network의 규명을 통해 유전자의 발현 조절 기작을 이해하고 유용한 유전자를 발굴하여 생명 현상 구명에 큰 기여를 할 것으로 보인다.


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