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학위논문 상세정보

OKT9 single chain Fv와 디프테리아 毒素를 利用한 免疫毒素의 製作 원문보기
Production of immunotoxin from OKT9 single chain Fv and diphtheria toxin

  • 저자

    도용희

  • 학위수여기관

    東亞大學校 大學院

  • 학위구분

    국내박사

  • 학과

    의학과

  • 지도교수

  • 발행년도

    1999

  • 총페이지

    iii, 27p.

  • 키워드

    면역독소 디프테리아 OKT9 single chain Fv;

  • 언어

    kor

  • 원문 URL

    http://www.riss.kr/link?id=T10067368&outLink=K  

  • 초록

    활발히 증식하는 세포들에서 많이 발현되는 transferrin 수용체를 대상으로 하는 새로운 면역독소를 만들었다. 리간드로는 transferrin 수용체에 대한 단세포군항체인 OKT9에서 Single chain Fv를 제작하여 사용하였으며, 독소는 Diphtheria 독소의 변형체인 CRM45를 사용하였다. OKT9 세포로부터 추출한 mRNA를 가지고 cDNA를 합성하여 heavy chain과 light chain의 유전자를 증폭하였다. Heavy chain과 light chain의 유전자와 linker fragment([Gly_(4)Ser]_(3))를 이용하여 PCR 반응을 통해 single chain Fv gene을 만들었으며 증폭된 OKT9 ScFv 재조합 유전자를 pGEM T-easy vector에 cloning하였다. CRM45는 단백질 합성을 억제시키는 subunit A 부분과 세포 내의 전위를 담당하는 subunit B의 아미노말단의 일부분만을 포함한 1158 bp로 이루어진 diptheria toxin 유전자를 증폭하여 pGEM T-easy vector에 cloning하였다. 이 유전자들을 splicing by overlap extension(SOE)법을 이용하여 DT_(389)-Linker-OKT9 ScFv 재조합 유전차를 제조하였다. 이것을 BL2l 균주에 형질 전환시켜 과발현시켰으며, 발현된 단백질은 transferrin 수용체 양성인 세포들에 대하여 세포 독성을 나타내었다.


    A novel immunotoxin was produced targeting transferrin receptors which are expressed heavily on the rapidly proliferating cells. Single chain Fv from OKT9, a monoclonal antibody against transferrin receptor, was used as a ligand, and CRM45, a derivative of diphtheria toxin, was used as a toxic moiety. Heavy chain and light chain cDNAs were made from mRNA isolated from OKT9 cell. Single chain Fv gene was made by linking heavy and light chain gene and linker fragment([Gly_(4)Ser]_(3)) using polymerase chain reaction(PCR). CRM45 is composed of subunit A which inhibits protein synthesis and subunit B which acts on translocation in the cell. This gene was amplified by PCR and cloned in pGEM T-easy vector. DT390-linker-OKT9 ScFv fusion gene was made from these genes by 'Splicing by Overlap Extension(SOE)' method. This was transformed to BL-21 cell, and overexpressed by IPTG, and this protein showed cytotoxicity to transferrin receptor positive cell lines.


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