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Generation of ROS via LTB_(4)-BLT2-linked cascade is involved in the transformation by oncogenic Ha-Ras v12 원문보기

  • 저자

    송해원

  • 학위수여기관

    고려대학교 대학원

  • 학위구분

    국내박사

  • 학과

    생명과학과

  • 지도교수

  • 발행년도

    2004

  • 총페이지

    ⅲ, 43p.

  • 키워드

    Cell culture Oncogenic Ha-Ras ROS measurement;

  • 언어

    eng

  • 원문 URL

    http://www.riss.kr/link?id=T10070428&outLink=K  

  • 초록

    종양유발인자인 Ras는 세포의 형질전환에 중요한 하위신호전달 매개 자인 활성산소(ROS)를 생성한다고 알려져 있다. Ras에 의한 형질전환에서 활성산소는 Rac의존적인 신호전달에 의한 생성으로 생각되지만, 종양유발인자, Ras가 어떻게 활성산소를 생성하는지에 대한 정확한 기작은 아직 밝혀지지 않은 상태이다. 최근 연구결과에 따르면, Ha-Ras^(v12)에 의한 형질전환에 leukotriene B_(4) 생성과정이 조정적 역할을 하고 있다고 밝혀졌다. 본 연구는 종양유발인자, Ras에 의한 활성산소생성에서 LTB_(4)의 저친화적 수용체인 BLT2의 역할을 알아보고자 했다. 우선, LTB_(4)생성이나 BLT2발현이 Ha-Ras^(v12)형질 전환된 세포인 HO6에서 높음을 확인 하였다. 또한 BLT2에 대한 (si)_RNA을 통해 BLT2 발현을 저하시키거나 BLT2에 대한 길항물질을 처리 했을 경우, 활성산소 생성이 극적으로 감소되는 것을 관찰 하였다. 이 결과와 상응하여, BLT2를 과다 발현 시킨 섬유아세포, Rat-2에서 활성산소 생성이 높았으며, 또한 부분적 형질전환 표현형을 보였다. BLT2에 대한 길항물질이나 활성산소의 억제제를 처리한 결과, H-Ras^(v12)형질 전환 세포와 BLT2를 과다 발현한 세포에서 세포 성자이나 활성산소 생성이 감소함을 통하여, BLT2가 활성산소 생성과 세포성장에 영향을 준다고 생각할 수 있다. NADPH oxidase와 같은 프라빈단백질의 억제물질인 DPI를 처리함으로써 이 세포들의 활성산소가 감소하는 반면 미토콘드리아 산화효소의 억제물질로 알려진 Rotenone의 처리에 활성산소 생성이 크게 영향을 받지 않음을 확인하였다. 이러한 사실을 종합해 봤을 때, 종양유발인자인 Ha-Ras^(v12)에 의한 형질전환 세포에서 관찰 되는 높은 활성산소 생성이 LTB_(4)와 BLT2의 신호전달과 관련하며, 이러한 활성산소는 NADPH oxidase에 기인함을 알 수 있다.


    Oncogenic Ras is known to generate reactive oxygen species(ROS) that act as a crucial downstream mediator leading to transformation. Although ROS production in Ras-transformed cells is suggested to be mediated by the Rac-dependent pathway, the exact mechanism by which oncogenic Ras mediates ROs generation remains to be further characterized. previous studies have demonstrated the potential mediatory roles of the leukotriene B_(4)(LTB_(4)) synthesis pathway in signaling to transformation induced by oncogenic Ha-Ras^(v12). In the present study, the role of BLT2, the low-affinity LTB₄ receptor, in the generation of ROS in Ha-Ras^(v12)-transformation has been investigated. LTB_(4) and BLT2 showed high elevation in Ha-Ras^(v12)-transformed cells. In addition, inhibition of BLT2 with antagonists or (si)_RNA-BLT2 dramatically suppressed ROS generation, Consistent to this observation, BLT2 overexpression itself was shown to elicit enhanced ROS generation as well as partial transformed phenotypes. Treatment with either BLT2 antagonist or ROS scavengers was shown to suppress the cell growth in both H-Ras^(v12)-transformed cells and BLT2 overexpressed cells, pointing to a signaling link between cell proliferation and ROS generation induced by LTB_(4). Treatment with DPI, an inhibitor of flavoenzymes such as NADPH oxidase, reduced intracellular ROS production while Rotenone(mitochondrial complex I inhibitor) showed little effect in these cells. Taken together, these results suggest a potential contributory role of 'LTB_(4)-BLT2' cascade leading to ROS generation by the NADPH oxidase system in oncogenic Ha-Ras^(v12)-mediated cell transformation.


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