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An Efficient Method for Epstein-Barr Virus (EBV)-induced Immortalization of Human B cell with CD19 Stimulation : CD19를 이용한 EBV에 의한 B 세포 불멸화의 효과적인 방법에 대한 연구 원문보기

  • 저자

    이미희

  • 학위수여기관

    고려대학교 생명공학원

  • 학위구분

    국내박사

  • 학과

    생명과학과 분자유전학 전공

  • 지도교수

  • 발행년도

    2004

  • 총페이지

    ⅴ, 48p.

  • 키워드

    Epstein-Barr Virus 세포불멸화 CD19 Stimulation;

  • 언어

    eng

  • 원문 URL

    http://www.riss.kr/link?id=T10071987&outLink=K  

  • 초록

    Epstein Barr 바이러스 (EBV)는 감마 herpesvirus로 전세계성인의 90%이상이 감염되었으며 ,인간의 휴지기 B 세포를 감염시켜서, in vitro에 지속적으로 증식시키며 이 과정을 불멸화라고 한다. EBV에 감염된 인간의 B세포로 형성된 세포주를 림포블라스토이드 세포주 (lymphoblastoid cell lines, LCL_(s))라 한다. 이러한 EBV-림포블라스토이드 세포주는 면역학적 및 유전학적 연구에서 다양한 목적으로 사용된다. 그러나, 알려지지 않은 기작에 의해 일부의 형질전환 실험은 실패를 하고, 몇몇의 EBV-LCL_(s)는 정상적인 배양조건에서 증식을 하지 않기도 한다. 따라서, 이 연구에서는 CD19와 BCR 자극으로 촉진된 B세포를 이용하여 효과적인 형질전환 방법을 연구하였다. 이 방법에서 CD19와 BCR로 전처리 하여 활성화시켰을 경우, EBV에 의해 형질전환된 B 세포에서 세포 표면 인자의 발현과 EBV 유전자의 발현은 변화되지 않았지만, EBV에 의해 불멸화되는데 소요되는 시간을 약 50% 단축시켜 주었다. 이 방법에서 CD19나 혹은 BCR에 자극되어 EBV 감염된 B 세포는 세포내의 LMP-1을 일반적인 방법보다 일찍 발현시키고 이것은 불멸화에 걸리는 시간과 관계가 있다. 결과적으로 CD19와 BCR자극을 이용한 변형된 방법은 감염 초기에 세포내의 LMP-1 발현을 통해 EBV-LCL_(s)를 만드는 효과적인 방법이라고 추측된다.


    Epstein-Barr virus (EBV) is an ubiquitous B-lymphotropic herpesvirus that is carried by more than 90% of adults. Infection of primary B Cells with EBV in vitro causes the activation of the cells and drives them into continuous proliferation, a process termed immortalization. Cell lines established by infection of primary human B cells with EBV are called lymphoblastoid cell lines (LCL_(s)). These EBV-LCLs have served a variety of purpose in immunological and genetic studies, but some trals of these transformations fail by unknown mechanism and several EBV-LCLs do not expand in normal culture condition. In this study, we modified a routine method using B cells induced by CK19 and BCR(B cell receptor) ligation. These methods shortened the time duration about 50% for the immortalization and generation of EBV-LCL_(s), whereas did not alter the cell phenotype of LCLs and expression of mRNA of EBV genes. In particular, CD19 and BCR co-ligation method was the most effective method comparing to the others. In addition, EBV infected B cell induced by CD19 and/or BCR ligation expressed intracellular LMP-1 protein earlier than routine method and expression of intracellular LMP-1 protein earlier than routine method and expression of intracellular LMP-1 protein had a close relation to the time of immortalization. These results suggest that the modified method using CD19 and BCR ligation may be an efficient method to generate EBV-LCL_(s) through the expression of intacellular LMP-1 protein at early stage.


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