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학위논문 상세정보

Development of CHO/dhfr cells resistant to oxidative stimuli and expressing erythropoietin in hypoxia condition 원문보기

  • 저자

    김한천

  • 학위수여기관

    고려대학교 생명공학원

  • 학위구분

    국내박사

  • 학과

    식품공학과 식품공학 전공

  • 지도교수

  • 발행년도

    2004

  • 총페이지

    ⅳ, 38p.

  • 키워드

    Development resistant stimuli;

  • 언어

    eng

  • 원문 URL

    http://www.riss.kr/link?id=T10074250&outLink=K  

  • 초록

    치료용 단백질 생산시 중요한 문제인 비용은 정제 공정의 비용이 대부분을 차지한다. 이 비용은 장기간의 배양 동안 생산성이 높은 세포들을 지속적으로 유지시킴으로써 줄일 수 있다. 본 연구에서는 동물 세포 배양시 유발되는 산화적 스트레스에 의한 세포사멸을 억제함으로써 생산성 높은 세포주를 개발하는데 그 초점을 맞추었다 . Chinese Hamster Ovary (CHO) 세포주는 재조합 치료용 단백질 생산에 가장 널리 이용되는 세포주이다 . 장기간 동물 세포 배양시 세포는 저산소증, 산화적 스트레스로 인한 많은 부산물들과 그들로 인한 세포 사멸을 겪는다 . 더불어 세포의 대사 과정에서 산소는 동물 세포 배양시 유용한 단백질 생산 과정 중 중요한 역할을 하는 수많은 인자들 중에 하나이다. 본 연구에서는 활성 산소종에서도 특히 superoxide radical anion 의 생성을 효과적으로 제거할 수 있는 효소 중 하나인 MnSOD를 도입하였다. 그 결과 산화적 스트레스에 의한 세포 사멸 유도를 차단함으로써 장기간 배양에도 생산성 높은 세포주를 개발하였다.


    Oxygen is one of the major factors at the side of cell metabolism in the production of beneficial proteins by cultured mammalian cells. MnSOD is known to serve as a defense system to protect cells against oxidative stress. Therefore it is useful to devise a novel system by which a high productivity of therapeutic recombinant proteins can be maintained during the extended period of time. To achieve this purposes, antioxidant MnSOD gene was introduced into CHO-EPO stable cell line. Exposure to oxidative stress, hydrogen peroxide (H₂O₂) and t-butyl hydroperoxide (TBH), was caused oxidative stress-mediated apoptosis. The MnSOD-overexpressed cell line showed the elevation of MnSOD enzyme activity, indicating that stable overexpression of MnSOD prevented cells from oxidative stress-mediated cytotoxicity caused with the treatment of H2O2 and TBH. In side of rhEPO productivity, the cell line that stably overexpress MnSOD showed elevation of EPO production. Taken together, these data suggest that MnSOD could protect cells form oxidative stimuli-induced apoptosis and affect the increase of rhEPO production.


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