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학위논문 상세정보

인간 탯줄 유래 혈관외피세포 무효소분리 및 염기성 섬유아세포성장인자에 의한 증식능 개발 원문보기
Expansion by basic fibroblast growth factor of non-enzymatically isolated perivascular cells from human umbilical cord

  • 저자

    나성훈

  • 학위수여기관

    울산대학교

  • 학위구분

    국내박사

  • 학과

    의학과 산부인과

  • 지도교수

    이필량

  • 발행년도

    2014

  • 총페이지

  • 키워드

    혈관외피세포 중간엽줄기세포 탯줄 염기성 섬유아세포성장인자;

  • 언어

    kor

  • 원문 URL

    http://www.riss.kr/link?id=T13540430&outLink=K  

  • 초록

    줄기세포는 자가증식능과 다양한 세포로의 분화능을 지니고 있어 배아의 발생기전 연구 및 특정 질병치료를 위한 재료로 큰 관심을 받고 있다. 그러나, 여러 조직의 효소처리에 의해 추출된 다분화능 중간엽줄기세포(mesenchymal stem cells, MSC)는 형태학적, 면역표현형적 및 기능적 이질성(heterogeneity)으로 인한 세포주 간 증식능 및 분화능의 편차가 정확한 재생능을 평가하는데 장애물이 되고 있다. 최근 혈관주변에 존재하는 혈관외피세포(perivascular cells, PVC)가 모든 MSC의 기원임이 밝혀진 이후 CD146을 이용하여 기존의 MSC보다 동질성(homogeneity)이 높은 PVC의 분리 및 배양이 가능해졌으며, 골수 유래 MSC 보다 월등한 증식능 및 분화능을 보유하고 있는 것으로 알려져 있다. 따라서, 태아나 성인 조직에서 PVC의 효율적인 분리와 증식은 하나 이상의 질병치료를 위해 충분한 양의 PVC를 얻는 것이 필수적이다. 본 연구에서는 인간 탯줄에 존재하는 혈관의 PVC를 효과적으로 분리 및 배양할 수 있는 방법을 개발하고, 더 나아가 증식능의 효율과 재생능을 향상하기 위한 다양한 성장인자의 평가를 통해 기존의 MSC의 한계를 극복하고자 하는 기반을 마련함으로써 세포치료에 보다 적합하고 효과적인 새로운 대안물질임을 제시하고자 한다. 본 연구는 강원대학교병원 기관윤리 위원회의 승인을 받은 후 2013년에 강원대학교병원 산부인과에 내원한 13명의 정상산모의 제왕절개수술 후 폐기되는 탯줄을 동의하에 사용하였다. 채취한 인간 탯줄에서 두 개의 동맥혈관을 분리하였다. 한 개의 동맥은 효소처리 없이 혈관외피세포를 분리하였고, 또 하나의 동맥은 효소처리해서 혈관외피세포를 분리하였다. 배양된 혈관외피세포가 줄기세포임을 확인하기 위해 지방세포 분화능(adipogenic differentiation), 골세포 분화능(osteogenic differentiation), 연골세포 분화능(chonrogenic differentiation)을 관찰하였다. 또한, 성장조절인자 처리를 통해 성장률을 비교하였으며, 유세포분석(flow cytometry), 면역세포화학적 특성 분석(immunocytochemistry), fluo- rescence activated cell sorting(FACS)를 이용해서 면역표현형을 기존의 효소처리 방법과 비교하였다. 연구 결과 두 가지 방법 모두 성장률과 면역표현형은 비슷하게 나타났지만, 기존의 효소처리 방법에 비해 효소 없이 시행한 방법에서 기존의 방법에 비해 CD146이 높은 빈도로 나타났다. 또한, 체외 배양 시 PVC의 증식능 향상을 위한 다양한 성장인자의 평가를 통해 섬유아세포성장인자(basic fibroblast growth factor, bFGF)가 S기로 세포들이 이동하게 해서 PVC 세포분열을 촉진함으로써 증식능을 향상시킨다는 것을 알 수 있었고, 다른 면역표현형의 변화 없이 PVC 배양에서 시기특이적 태아성 항원(Stage-specific embryonic antigen, SSEA)-4가 상승되는 것을 확인하였다. 그러므로, 무효소 배양 방법과 bFGF의 처리를 같이 하면 인간 탯줄에서 동질성이 더 좋은 PVC를 배양 할 수 있는 획기적인 배양 방법일 수 있을 것이다. 또한, 이를 이용해서 PVC의 분리 및 효율적인 체외 증식 방법의 개발이 다양한 질병치료를 위한 PVC의 세포치료제로의 활용도를 높일 수 있는데 기여할 것으로 생각된다.


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