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Agrobacterium에 의한 더덕의 형질전환과 식물체 재분화
Genetic Transformation and Plant Regeneration of Codonopsis lanceolata Using Agrobacterium

최필선    (한국과학기술연구원 유전공학연구소 생물자원연구그룹 전북대학교 자연대학 생물학과   ); 김윤성    (한국과학기술연구원 유전공학연구소 생물자원연구그룹   ); 유장렬    (한국과학기술연구원 유전공학연구소 생물자원연구그룹   ); 소웅영    (전북대학교 자연대학 생물학과  );
  • 초록

    CaMV35S promoter- $\beta$ -glucuronidase (GUS) 유전자와 선발 표지로서 neomycin phosphotransferase 유전자를 가진 pBI121 binary 벡터를 도입한 Agrobacterium turmfaciens LAB4404와 더덕 유식물체의 자엽 절편을 1 mg/L BA가 첨가된 MS 배지에서 48시간 동안 공동배양한 후 1 mg/L BA, 250 mg/L carbenicillin 100 mg/L kanamycin sulfate을 첨가한 고체배지에 옮겨 명조건에서 배양하였다. 배양 2주 후 절편의 절단면 부근으로부터 수많은 부정아가 형성되기 시작하였다. 이들 부정아의 GUS 활성을 조사한 결과 15%가 양성반응을 나타내었다. 배양 6주 후 절편이 형성한 수많은 부정아로부터 56.7% 빈도로 shoot이 발달하였다. 이들 shoot은 기본배지에 옮겨서 4주 경과되었을 때 대부분 발근하였으며, 재분화된 개체는 토양에 이식하였다. Southem 분석결과 GUS양성을 보인 재분화 개체의 게놈 DNA에 GUS 유전자가 삽입되었음이 확인되었다.


    To obtain transformed plants, we cocultured cotyledonary explants of Codonopsis lanceolata with Agrobacterium tumefaciens LBA4404, a disamed strain harboring a binary vector pBI121 carrying the CaMV35S promoter- $\beta$ -glucuronidase (GUS) gene fusion used as a reporter gene and NOS promoter-neomycin phosphotransferase gene as a positive selection marker in MS liquid medium with 1mg/L BA. After 48 h of culture, explants were transferred onto MS solid medium with Img/L BA, 250mg/L carbenicillin, and 100mg/L kanamycin sulfate and cultured in the dark. Numerous adventitious buds formed on the cut edges of the explants after 2 weeks of culture. When subjected to GUS histochemical assay buds showed a positive response at a frequency of 15%. Explants formed adventitious shoot at a frequency of 56.7%, after 6 weeks of culture. Upon transfer onto the basal medium, most of the shoots were rooted and subsequently the regenerants were transplanted to potting soil. Southern blot analysis confirmed that the GUS gene was incorporated into the genomic DNA of the GUS-positive regenerants.


  • 주제어

    Agrobacterium tumefaciens .   cotyledonay explants .   ${\beta}$-glucuronidase .   transformed plants.  

  • 이 논문을 인용한 문헌 (2)

    1. 1999. "Development of Transgenic Plant (Codonopsis lanceolata Trautv.) Harboring a Bialaphos Resistance Gene, bar" 식물조직배양학회지 = Korean journal of plant tissue culture, 26(4): 281~287     
    2. 2000. "Introduction of RAG25gene into Codonopsis lanceolata by Agrobacterium tumefaciens" 식물조직배양학회지 = Korean journal of plant tissue culture, 27(6): 491~496     

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