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폴리비닐 알콜 분해균 Xanthomonas campestris J2Y의 Polyvinyl alcohol oxidase 정제 및 성질
Purification and Properties of the Polyvinyl alcohol oxidase from Xanthomonas campestris J2Y

권대준   (영남대학교 응용미생물학과UU0000951  ); 조윤래   (영남대학교 응용미생물학과UU0000951  );
  • 초록

    생물학적 난분해성 물질인 폴리비닐 알콜(PVA : Polyvinyl alcohol)을 탄소원 및 에너지원으로 이용하는 Xanthomonas campestris J2Y로부터 PVA oxidase를 생산하여 정제하기 위하여 PVA가 탄소원으로 첨가된 배지에서 진탕배양한 배양액을 원심분리한 후 상등액을 10 mM phosphate buffer(pH 7.5)로 평형시킨 DEAE -cellulose를 통과시켜 얻은 분획을 사용하여 DEAE-cellulose와 Sephadex G-150을 이용한 Gel filtration을 통하여 PVA oxidase를 정제하였다. 정제된 PVA oxidase는 polyacrylamide gel 전기영동으로 단일밴드로 확인되었으며 SDS-polyacrylamide gel 전기영동과 Sephadex G-150 column chromatography를 통해 측정한 결과 55,000 daltons 이었다. PVA oxidase의 최적 pH는 7이고 최적온도는 $37^{\circ}C$ 였다. 열 안정성은 $50^{\circ}C$ 까지는 70% 이상의 안정성을 나타내었고, pH에 대한 안정성은 5-11에서 비교적 안정하였다. 금속이온에 대한 영향은 $Ag^{2+},\;Hg^{2+},\;Sn^{2+}$ 등에서는 아주 강한 저해를 받았고, $Co^{2+},\;Fe^{2+},\;Zn^{2+},\;Pb^{2+}$ 에서는 50% 정도의 저해를 받았다. 반면에 $Mn^{2+},\;Cu^{2+}$ 는 효소활성을 증가시켰다. PVA에 정제 PVA oxidase의 Km치는 $7.04{\times}10\;^2mmol/{\ell}$ 이었다.


    The Polyvinyl alcohol(PVA) oxidase involved in PVA degradation by microorganism has been purified to homogeneity from culture broth of Xanthomonas campestris J2Y grown in a minimal medium containing PVA as a sole carbon source. The enzyme was purified by DEAE-cellulose chromatograpy and Sephadex G-150 gel filtration. The purified PVA oxidase was electrophoretically homogeneous both in the absence and presence of SDS. The molecular weight of the enzyme was estimated to be about 55,000 daltons by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis and Sephadex G-150 gel filtration. The native enzyme existed as a monomer. The optimal pH and temperature was shown to be pH 7 and $37^{\circ}C$ respectively. The activity of enzyme was stable below $55^{\circ}C$ and between pH range of $5{\sim}11$ . The enzyme activity was significantly inhibited by metal compounds such as $Ag^{2+},\;Hg^{2+}$ . While, metal ions such as $Mn^{2+},\;and\;Cu^{2+}$ stimulated the reaction. Km value of the enzyme for PVA was $7.04{\times}10^{-2}mmol/{\ell}$ .


  • 주제어

    Xanthomonas sp.   J2Y .   Polyvinyl alcohol oxidase .   Polyvinyl alcohol(PVA).  

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    1. 1992 "Polyvinyl alcohol 이용 공생균 Pseudomonas sp. J2W와 Xanthomonas sp. J2Y의 특성" 한국농화학회지 = Journal of the Korean society of Agricultural Chemistry and Biotechnology 35 (1): 30~35    
    2. 1992 "Bacillus licheniformis SSA3-2M1 이 생산하는 Proteinases" Korean journal of microbiology = 미생물학회지 30 (4): 239~245    
    3. 1992 "Bacillus stearothermophilus 에서 부분 정제한 Cytosine Deaminase 의 특성" Korean journal of microbiology = 미생물학회지 30 (4): 305~309    
    4. 1992 "폴리비닐 알콜 분해균주의 분리 및 특성" 산업미생물학회지 = Korean journal of applied microbiology and biotechnology 20 (1): 96~101    
    5. 1992 "Bacillus sp. SSA3 균주의 Expression Vector 개발" 산업미생물학회지 = Korean journal of applied microbiology and biotechnology 20 (6): 637~641    
    6. 1995 "폴리비닐 말콜 분해균 Pseudomonas cepaia G5Y의 Polyvinyl alcohol oxidase 정제 및 특성" 산업미생물학회지 = Korean journal of applied microbiology and biotechnology 23 (2): 203~208    
    7. 2002 "잡초성벼의 superoxide dismutase cDNA cloning과 재배벼로의 형질전환" 한국환경농학회지 = Korean journal of environmental agriculture 21 (2): 156~161    
    8. 2011 "Characterization of an Enzyme Capable of Degrading the Sheath of the Sphaerotilus natans from Terrabacter sp. FK3" Journal of the Korean Society for Applied Biological Chemistry 54 (5): 750~757    

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