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역미셀계내에서 인지질분해효소 $A_2$에 의한 레시친의 가수분해
Hydrolysis of Phosphatidylcholine in Aerosol-OT/Isooctane Reversed Micelles by Phospholipase $A_2$

장판식   (서울산업대학교 식품공학과UU0000705  );
  • 초록

    물을 극미량 함유하는 미수계 효소반응계인 aerosol-OT/이소옥탄으로 구성된 역미셀계내에서 레시친의 일종인 DPPC (dipalmitoyl phosphatidylcholine)의 가수분해반응을 phospholipase $A_2$ 가 촉매할 수 있었다. 또한 phospholipase $A_2$ 에 의한 가수분해반응을 정량분석하기 위한 고성능 액체 크로마토그래피에 의한 예민하고 간편한 방법을 고안하였는 바, 이에 의하여 aerosol-OT/이소옥탄 역미셀계내에서 phospholipase $A_2$ 에 의한 가수분해반응의 동력학적인 분석이 가능하였다. 한편, 여러가지 유화제와 유기용매 중 aerosol-OT와 이소옥탄일 때 효소반응이 가장 효과적이었으며, 반응 적정온도는 $35{\sim}40^{\circ}C$ , 적정 pH는 7.0이었다. 또한 역미셀계내에서의 가수분해반응은 수분 함량변화에 민감하였으며, R-값(=[water]/[aerosol-OT])이 10.0일 때 가장 높은 효소활성을 나타내었다. 효소반응을 위한 최적조건하에서의 $K_{m,app.}$ 및 $V_{max.,app.}$ 는 각각 8.73 mM, 2.83 units/㎎ protein이었으며, 역미셀계내에서 phospholipase $A_2$ 에 의한 DPPC가수분해반응의 활성화에너지는 12.31 kcal/mole로 산출되었다.


    Bee venom (Apis mellifera) phospholipase $A_2$ solubilized in reversed micelles containing small amount of water stabilized by surfactant could catalyze the hydrolysis of dipalmitoyl phosphatidylcholine (DPPC). A sensitive and simple high performance liquid chromatographic (HPLC) methodology of phospholipase $A_2$ assay for the hydrolysis of DPPC was developed. Kinetic analysis of the phospholipase $A_2$ -catalyzed reaction was found to be possible in reversed micelles. Among the surfactants and organic solvents tested, aerosol-OT and isooctane were most effective for the hydrolysis of DPPC in reversed micelles. Optimal temperature, optimal pH, $K_{m,app.},\;V_{max.,app.}$ and activation energy were determined to be $35{\sim}40^{\circ}C$ , 7.0, 8.73 mM, 2.83 units/㎎ protein and 12.31 kcal/mole, respectively. The hydrolysis activity was dependent on water content and maximum activity was obtained at R value (=[water]/[aerosol-OT]) of 10.0.


  • 주제어

    phospholipase $A_2$ .   HPLC .   lysophosphatidylcholine .   reversed micelles.  

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    5. 1994 "W/O형 유화계의 유화안정성 분석에 있어서의 유화안정지수와 HLB값과의 관계 규명" 분석과학 = Analytical science & technology 7 (2): 237~243    
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    8. 1998 "${\omega}3$계 고도불포화지방산을 함유한 고안정성 수중유적형 유화계의 확립" 한국식품과학회지 = Korean journal of food science and technology 30 (5): 1114~1119    
    9. 1998 "Glucansucrases를 이용한 새로운 올리고당의 합성" 산업미생물학회지 = Korean journal of applied microbiology and biotechnology 26 (2): 179~186    
    10. 1999 "Lipomyces starkeyi와 Leuconostoc mesenteroides의 혼합배양에 의한 올리고당과 Dextran의 생성 및 생성당의 특성 연구" 산업미생물학회지 = Korean journal of applied microbiology and biotechnology 27 (4): 304~310    

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