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Bacillus firmus Cyclodextrin Glycosyltransferase의 정제 및 특성
Purification and Characterization of Cyclodextrin Glycosyltransferase from Bacillus firmus

손천배   (충남대학교 식품영양학과UU0001302  ); 김성애   (충남대학교 식품영양학과UU0001302  ); 박영아   (충남대학교 식품영양학과UU0001302  ); 김명희   (충남대학교 식품영양학과UU0001302  ); 문숙경   (충남대학교 식품영양학과UU0001302  ); 장순애   (충남대학교 식품영양학과UU0001302  ); 이명선   (충남대학교 식품영양학과UU0001302  );
  • 초록

    Bacillus firmus가 생산하는 cyclodextrin glycosyltran-sferase(CGTase)를 ammonium sulfate 침전, DEAE-Sephadex A-50 및 Sephdex G-100 column chromatography로 분리, 정제하였다. 이 방법으로 수율은 12%, 정제도는 49배인 SDS-PAGE 상에서 단일 band의 효소 단백질을 얻을 수 있었다. 정제된 CGTase는 Phast system의 SDS-polyacrylamide gel 전기영동에 의하여 분자량은 80,000dalton, isoelectric focusing으로 등전점은 9.6으로 추정되는 단백질이었다. 이 효소의 최적 활성 pH와 온도는 8.0, $65^{\circ}C$ 이였으며, pH와 열안정성은 $pH\;5.5{\sim}9.0$ , $50^{\circ}C$ 이였다. Soluble starch를 기질로 하여 24시간 효소반응한 액의 ${\alpha}-\;:\;{\beta}-\;:\;{\gamma}-cyclodextrin$ 의 생성비율은 0.01 : 2.90 : 1.00으로 ${\beta}-$ 및 ${\gamma}-cyclodextrin$ 을 주로 생산하였다.


    The cyclodextrin glycosyltransferase(EC 3.2.1.19) from Bacillus firmus was purified by precipitating with ammonium sulfate followed by, DEAE-Sephadex A-50 column chromatography and Sephadex G-100 column chromatography. In this way, we were able to obtain the single band protein on SDS-PAGE with a yield of 12%, whose purity was 49 fold. The purified CGTase was identified as a protein having molecular weight of approximately 80,000 dalton and isoelectric point of 9.6. The optimum pH and temperature for the enzyme activity were 8.0 and $65^{\circ}C$ , respectively. The enzyme was stable at between pH 5.5 and 9.0 and up to $50^{\circ}C$ . After 24hr of enzyme reaction using soluble starch as substrate, the ratio of ${\alpha}-$ , ${\beta}-$ and ${\gamma}-cyclodextrin$ production was 0.01 : 2.90 : 1.00, respectively. And this CGTase pro-duced mainly ${\beta}-$ and ${\gamma}-cyclodextrin$ .


  • 주제어

    Bacillus firmus .   cyclodextrin glycosyltransferase .   cyclodextrin.  

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    9. 1998 "Cyclodextrin (CD) 합성 효소" 생물산업 : 한국미생물·생명공학회 소식지 = Bioindustry news 11 (1): 14~18    
    10. 1999 "감마선 조사가 돈육 등심의 이화학적 특성에 미치는 영향" 한국식품과학회지 = Korean journal of food science and technology 31 (3): 705~711    
  • 김성애 (25)

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