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토끼에서 수핵란의 세포질 활성화에 의한 제 2세대 복제수정란의 생산
Production of Second Generational Cloning Embryos with Activated Oocytes in Rabbits

이효정    (경상대학교 수의과대학   ); 윤희준    (경상대학교 수의과대학   ); 최창용    (경상대학교 수의과대학   ); 공일근    (경상대학교 농과대학 축산학과   ); 박충생    (경상대학교 농과대학 축산학과   ); 최상용    (경상대학교  );
  • 초록

    Large scale production of cloned embryos requires the technology of multiple generational nuclear transfer(NT) by using NT embryos itself as the subsequent donor nuclei. In this work we investigated comparatively the effects of enucleated oocytes treated with ionomycin and 6-DMAP on the electrofusion rate and in vitro developmental potential in the first and second NT embryos. The embryos of 16-cell stage were collected from the mated does by flushing oviducts with Dulbecco's phosphate buffered saline(D-PBS) containing 10% fetal calf serum(FCS) at 47 hours after hCG injection. The recipient cytoplasms were obtained by removing the nucleus and the first polar body from the oocytes collected at 15 hours after hCG injection. The enucleated oocytes were pre-activated by 5 min incubation in 5 $\mu$ M ionomycin and 2 hours incubation in 2 mM 6-DMAP at 19~20 hours post-hCG before microinjection. In the first and second generation NT, the unsynchronized 16-cell stage embryos were used as nuclear donor. The separated donor blastomeres were injected into the enucleated activated recipient oocytes by micromanipulation and were electrofused by electrical stimulation of single pulse for 60 $\mu$ sec at 1.25kV/cm in $Ca^2$ +, $Mg^2$ + - free 0.28 M mannitol solution. In the non-preactivation group, the electrofusion and electrical stimulation was given 3 pulses for 60 $\mu$ sec at 1.25 kV/cm in 100 $\mu$ M $Ca^2$ +, $Mg^2$ + 0.28 M mannitol solution. The fused oocytes were co-cultured with a monolayer of rabbit oviductal epithelial cells in TCM-199 solution containing 10% FCS for 120 hours at 39 $^{\circ}C$ in a 5% $CO_2$ incubator. The results obtained were summarized as follows: 1. In the first generational NT embryos, the electrofusion rate of preactivated and non-activated oocytes(80.4 and 87.8%) was not significantly different, but in the second generational NT embryos, the electrofusion rate was significantly(P


  • 주제어

    nuclear transfer .   second generation cloning .   ionomycin .   6-DMAP .   rabbit embryo.  

 저자의 다른 논문

  • 이효정 (4)

    1. 1994 "한우 체외성숙란의 단위발생에 대한 전기자극의 효과" 韓國受精卵移植學會誌 = Korean journal of embryo transfer 9 (2): 145~152    
    2. 1994 "핵이식에의한 복제토끼 생산" 韓國受精卵移植學會誌 = Korean journal of embryo transfer 9 (2): 161~166    
    3. 2006 "대두 calmoduine유전자 SCaM-5를 발현하는 형질전환 토마토의 병 저항성 검정" Journal of plant biotechnology = 식물생명공학회지 33 (2): 93~97    
    4. 2006 "애기장대에서 고염 스트레스 내성에 관여하는 OSM1/SYP61 유전자의 동정" 식물생명공학회지 = Korean journal of plant biotechnology 33 (1): 11~18    
  • Kong, Il-Keun (26)

  • 박충생 (87)

  • 최상용 (72)

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