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벼 HMG-CoA 환원효소의 특성연구
Characterization and Purification of a Microsomal 3-Hydroxy-3-Methylglutaryl-CoA Reductase in Rice Seedling

김제현   백융기    (   ); 김종범    (농촌진흥청 농업과학기술원 생화학과   ); 김종국    (   ); 황영수    (농촌진흥청 농업과학기술원 생화학과   ); 하선화    (농촌진흥청 농업과학기술원 생화학과  );
  • 초록

    3-Hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A (HMG-CoA) 환원효소는 식물의 병원균 방어물질 (phytoalexin), 광합성 색소 (the phytol of chlorophyll), 성장 호르몬 (abscisic acid와 gibberellin 등) 및 스테롤 (phytosterol) 등의 생합성에 관여하는 주효소이다. 암조건 하에서 발아 후 4일째의 벼 유묘 microsome을 재료로 비이온성 detergent 인 Brij W-1 (final 0.4%)을 사용하여 가용화 시킨 후, DEAE-Sephadex A-50 크로마토그래피 칼럼과 hexaneagarose를 matrix로 기질인 HMG-CoA를 결합시켜 제조한 친화성 크로마토그래피 칼럼을 이용하여 세포막 결합효소인 HMG-CoA 환원효소를 정제하였다. 정제된 HMG-CoA 환원효소의 최종 회수율은 7.14% 였고, 분자량은 10% SDS-PAGE에서 55 kDa이였다 HMG-CoA 환원효소의 최적 반응 온도는 $37^{\circ}C$ , 최적 반응 pH는 6.9였고, 기질인 HMG- CoA에 대한 HMG-CoA 환원효소의 $K_m$ 및 $V_{max}$ 값은 $180\;{\mu}M$ 과 107 pmol/mg, 수소공여체인 NADPH에 대한 $K_m$ 과 $V_{max}$ 값은 $810\;{\mu}M$ 과 32.1 pmol/min/mg이였다.


    3-Hydroxy-3-methylglutaryl-CoA reductase (HMGR) catalyzes the conversion of HMG-CoA to mevalonic acid, the first intermediate of isoprenoid biosynthetic pathway in plants. The enzyme was solubilized with 0.4% Brij (polyoxyethylene ether) W-1 from a microsomal fraction of etiolated rice seedlings (Oryza sativa L.) in which its maximal activity was observed on the fourth day after germination. HMGR was purified to near homogeneity by employing $(NH_4)_2SO_4$ fractionation plus chromatographic procedures including DEAE-Sephadex A-50 and HMG-CoA-hexane-agarose affinity column. The size of the purified enzyme was estimated to be 55 kDa when judged by SDS-PAGE analysis with silver staining method. The apparent $K_m$ and $V_{max}$ values for HMG-CoA were determined to be $180\;{\mu}M$ and 107 pmol/min/mg, and those for NADPH were $810\;{\mu}M$ and 32.1 pmol/min/mg, respectively.


  • 주제어

    벼 .   HMG-CoA 환원효소.  

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    1. 1994 "벼 흑조위축병 바이러스의 분자생물학적 연구" 한국농화학회지 = Journal of the Korean society of Agricultural Chemistry and Biotechnology 37 (3): 148~153    
    2. 1997 "Cholesterol Biosynthesis from Lanosterol: Development of a Novel Assay Method, Characterization, and Solubilization of Rat Hepatic Microsomal Sterol Δ7-Reductase" Journal of biochemistry and molecular biology = 한국생화학회지 30 (5): 370~377    
    3. 1998 "Participation of SRE4, an URE1 Enhancer Core Sequence, in the Sterol-Mediated Transcriptional Upregulation of the Human Apolipoprotein E Gene" Journal of biochemistry and molecular biology = 한국생화학회지 31 (6): 565~571    
    4. 2004 "Anti-Candida Activity of YH-1715R, a New Triazole Derivative" Journal of microbiology and biotechnology 14 (4): 693~697    
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