본문 바로가기
HOME> 논문 > 논문 검색상세

논문 상세정보

랫드 후각점막내 Zinc 이온의 조직화학적 동정
Histochemical Detection of Ionic Zinc in the Rat Olfactory Mucosa: Zinc Selenium Autometallography ($ZnSe^{AMG}$)

남동우   (한림대학교 의과대학 해부학교실UU0001493  ); 손원재   (한림대학교 의과대학 해부학교실UU0001493  ); 김성주   (한림대학교 의과대학 해부학교실UU0001493  ); 김용국   (한림대학교 의과대학 해부학교실UU0001493  ); 김수진   (한림대학교 자연과학대학 생물학과UU0001493  ); 유윤조   (우석대학교 한의학과UU0001001  ); 정영길   (건양대학교 의과대학 해부학교실UU0000053  ); 조승묵   (한림대학교 의과대학 해부학교실UU0001493  );
  • 초록

    본 연구는 후각점막에 내재하는 zinc의 분포를 형태학적으로 뚜렷이 보여준 예가 없기에 조직화학적으로 염색한 후 광학 및 전자현미경으로 이들의 분포를 기술하고자 하였다. 실험동물로는 성숙한 수컷 랫드(SD 계통)를 사용하였다. 우선 동물은 전신마취시킨 후 만들어진 selenium 용액 $100{\mu}l$ 를 복강에 주사하였고(i.p 실험군), 다른 방법으로는 selenium 용액 $100{\mu}l$ 를 비강 깁숙히 플라스틱관을 삽입한 후 Hamilton 주사기로 한 방울씩 떨어뜨렸다(i.n 실험군). 후각점막내 zinc를 조직화학법으로 동정하기 위해서 zinc 특이성이 높은 AMG법(Danscher, 1985)을 이용하였다. 각 실험군의 동물은 주사 후 2시간에 이르러 3% Glutaraldehyde 고정액으로 관류함으로써 희생시켰다. 고정후 비중격을 포함하여 후각부위를 떼어낸 수 $30{\mu}l$ 두께의 관상절편을 만들었다. AMG 반응이 끝나면 toluene blue (TB)로 대조염색하고, 알코올과 자일렌 등을 이용한 탈수과정 및 청명과정을 거쳐 광학현미경하에서 관찰하였다. 전자현미경적 절편을 만들기 위해 전자현미경 관찰을 위한 실험으로 vibratome을 사용하여, $100{\mu}m$ 두께의 가로절편을 만들었고, AMG염색이 끝나면 일반적인 전자현미경적 관찰을 위한 일련의 과정을 거쳐 투과전자현미경하에서 관찰하였다. Selenium 용액을 복강에 투여한 i.p 실험군에서는 $30{\mu}m$ 두께의 후각점막의 상층부와 기저부에서 강한 AMG 반응산물(silver grains)이 관찰되었으나 기저막아래 고유판에서는 전혀 관찰되지 않았다. 반면 selenium 용액을 비강점막에 직접 도포한 i.n 실험군에서는 i.p 실험군과 같이 후각점막에서 강한 AMG 반응이 관찰되었을 뿐만 아니라 이러한 반응이 기저막내 후각실의 주행을 따라 관찰되었다. 투과전자현미경으로 관찰된 후각상피에서는 AMG 과립이 지지세포의 세포 상층부에서 관찰되는 분비과립에 국한되는 소견이며, 이곳에서 관찰된 AMG은 과립(silver grains)은 원형 또는 난원형으로 그 크기는 다양하였다. 반면 세포체 하부에서 관찰된 AMG grains은 주로 용해소체위에서 밀집되어 관찰되었으며, 핵주변부 및 세포사이공간(intercellular space)에서는 AMG grains이 낱개로 구분, 관찰되었다. 한편 i.n 실험군에서 관찰된 후각점막의 전반적인 구조가 손상된 소견을 보였으며, 지지세포의 위쪽에서는 전자밀도가 높고 간상의 crystalloid structure가 다수 관찰되었고, 이들 구조에 다수의 AMG 과립이 붙어 있었다. 본 연구의 결과를 요약하면 랫드 후각점막에 존재하는 zinc는 지지세포의 분비과립과 후각세포의 축삭다발인 후각실에서 관찰되었는데 이는 zinc가 후각기능과 매우 밀접한 관련있음을 시사하며, 이는 향후 후각기능과 zinc의 연관성을 연구하는데 소중한 자료가 될 것으로 믿는다. 또한 본 연구의 결과는 후각점막의 이상으로 나타나는 여러 가지 질환의 병리에서 zinc가 영위하는 신경생물학적 기능을 밝히는데 유용한 기초자료가 될 수 있을 것으로 기대한다.


    The present study was designed to demonstrate ionic zinc in the rat nasal mucosa by means of zinc selenium autometallography ( $ZnSe^{AMG}$ ). Rats were given sodium selenide either intraperitoneally (i.p) or intranasally (i.n). Prior to the i.n. administration the rats were anesthetized with pentobarbital sodium (30 mg/kg, i.p.). A thin plastic tube coupled to a Hamilton syringe was then inserted into the right nostril and $10{\mu}l$ of the solution was instilled. For the i.p. administration non-anesthetized rats were given $100{\mu}l$ of the sodium selenide solution (10 mg/kg). Control rats were instilled with saline. After 2 hrs survival, the rats were anaesthetized and transcardially perfused with 3% glutaraldehyde. The olfactory area was removed and put into same fixative. The nose was then sectioned ( $30{\mu}m$ ) horizontally, autometallography (AMG) was performed according to Danscher et al. (1997). After silver enhancement, fine AMG grains were scattered in the whole length of the olfactory epithelium containing olfactory receptor neurons, sustentacular and basal cells. However, much higher concentration of the AMG grains occupied near the surface and in the basal region of the olfactory epithelium. Both groups of i.p. and i.n. administration showed almost same level in the concentration of the AMG grains. In i.n. group, few AMG grains were also found in olfactory nerves of the lamina propria, suggesting zinc transport into the olfactory bulb via olfactory axons. At the electron microscopic level, the AMG grains were most entirely found in the supporting cells of the olfactory epithelium, and they were mostly localized in lysosome-like organelles. The i.n. group showed various signs of tissue damage of the olfactory mucosa, where dense concentration of AMG grains were localized at crystalloid structures. The present study demonstrated dense population of ionic zinc in the rat olfactory epithelium. zinc may play a role in the olfactory functioin and in the pathogenesis of the neurodegerative disorders affecting nose.


  • 주제어

    AMG grains .   Lysosome .   Olfactory mucosa .   Rat .   Sodium selenide .   Supporting cells .   Zinc.  

  • 참고문헌 (26)

    1. Cole TB, Wenzel HJ, Kafer KE, Schwartzkroin PA, Pahniter RD: Elimination of zinc from synaptic vesicles in the intact mouse brain by disruption of the ZnT3 gene, Proc Natl Acad Sci USA 96:1716 1721,1999 
    2. Danscher G, Howell G, Perez Clausell J, Hertel N: The dithizond, Timm's sulphide silver and the selenium me-thods demonstrate a chelatable pool of zinc in CNS: a proton activation (PIXE) analysis of carbon tetrachloride extracts from rat brains and spinal cords intravitally treated with dithizone, Histochemistry 83: 419 422, 1985 
    3. Jo SM, Kim YK, Wang Z, Danscher G: Retrograde tracing of zinc enriched (ZEN) neuronal somata projecting to the olfactory bulb, Brain Res 956 : 230 235,2002 
    4. Samudralwar DL, Diprete CC, Ni BF, Ehmann WD, Markesbery WR: Elemental imbalances in the olfactory pathway in Alzheimer's disease, J Neurological Sci 130(2) 139 145, 1995 
    5. Takeda A, Ohnwna M, Sawashita J, Okada S: Zinc transport in the rat olfactory system, Neurosci Lett 225 : 69 71, 1997 
    6. Wenzel HJ, Cole TB, Born DE, Schwartkroin PA, Palmiter RD: Ultrastructural localization of zinc transporter 3 (ZnT 3) to synaptic vesicles membranes within mossy fiber boutons in the hippocampus of mouse and monkey, Proc Natl Acad USA 94(23) : 12676 12681, 1997 
    7. Cuajungco MP, Lees GJ: Zinc metabolism in the brain: relevance to hwnan neurodegenerative disorders, Neurbiol Dis 4: 137 169,1997 
    8. Danscher G: Autometallography: a new technique for light and electron microscopic visualization of metals in biological tissues (gold, silver, metal sulphides and metal selenides), Histochemistry 81: 331 335,1984 
    9. Kim IG, Jeong YG, Choi CD, Cho WB: Light and electron microscopic studies on the effects of para cholorphenylalanine in the exocrine pancreas of rats, The Korean J Anat 27(3): 237 253,1994 
    10. Danscher G: Exogenous selenium in the brain, A histochemical technique for light and electron microscopical localization of catalystic selenium bonds, Histochemistry 76(3): 281 293,1982 
    11. Frederickson CM, Rampy BA, Reamy Rampy S, Howell GA: Distribution of histochemically reactive zinc in the forebrain of the rat, J Chem Neuroana 5: 521 530,1992 
    12. Jo SM, Kim SJ, Park SK, Kang TC, Won MH: Do panenth cells regulate the zinc body burden? Korean J Electron Microscopy 30(4) : 357 365, 2000 
    13. Perez Clausell J, Danscher G: Intravesicular localization of zinc in rat telencephalic boutons: a histochemical study, Brain Res 337: 91 98,1985 
    14. Danscher G: Histochemical demonstration of heavy metals, A revised version of the sulphide silver method suitable for both light and electron microscopy, Histochemistry 71(1) : 1 16,1981 
    15. SawashitaJ, TakedaA, Okada S: Changes of zinc distribution in rat brain with increasing age, Develop Brain Res 102 : 295 298,1997 
    16. Frederickson CJ, Kasarskis, EJ, Ringo D, Frederickson RE: A quinoline fluorescence method for visualizing and assaying the histochemically reactive zinc (bouton zinc) in the brain, J Neurosci Methods 20 : 91 103,1987 
    17. Palmiter RD, Cole TB, Quaife CJ, Findley SD: ZnT 3, a putative transporter of zinc into synaptic vesicles, Proc Natl Acad Sci USA 93: 14934 14939,1996 
    18. Jo SM, Won MH, Cole TB, Jen MS, Palmiter RD, Danscher G: Zinc enriched (ZEN) terminals in mouse olfactory bulb, Brain Res 865: 227 236,2000 
    19. Lees GJ, Cuajungco MP, Leong W: Effects ofmetal chelating agents on the direct and seizures related neuronal death induced by zinc and kainic acid, Brain Res 799 : 108 117, 1997 
    20. Liu T, Wallcer JS, Tracey OJ: Zinc alleviates thennal hyperalgesiadue to partial nerve injury, Neuroreport 10(7) 1619 1623,1999 
    21. Kullcarni Narla A, Getchell TV, Schmitt FA, Getchell ML: Manganese and copper zinc superoxide dismutases in the human olfactory mucosa: Increased immunoreactivity in Alzheimer's disease, Exp Neurol 140(2): 115 125,1996 
    22. Frederickson CJ, Hernandez MD, McGinty JF: Translocation of zinc may contribute to seizure induced death ofneu-rons, Brain Res 480: 317 321,1989 
    23. Larson AA, Kitto KF: Chelation of zinc in the extracellular area of the spinal cord, using ethylenediaminetetraacetic acid disodium calcium salt or dipicolinic acid, inhibits the antinociceptive effect of capsaicin in adult mice, J Pharmacol Exp Ther 288(2): 759 765,1999 
    24. Suh SW, Koh Jy, Choi DW: Extracellular zinc mediates selective neuronal death in hippocampus and amygdala following kainate induced seizures. Soc for Neurosci Abst 22: 2101, 1996 
    25. Koh JY, Soo SW, Byoung JG, Yong YH, Chung YH, Choi DW: The role of zinc in selective neuronal death after transient global cerebral ischemia, Science 272 1013 1016,1996 
    26. Takeda A: Movement of zinc and its functional significance in the brain. Brain Res Rev 34 : 137 148,2000 

 저자의 다른 논문

 활용도 분석

  • 상세보기

    amChart 영역
  • 원문보기

    amChart 영역

원문보기

무료다운로드
  • NDSL :
유료다운로드
  • 원문이 없습니다.

유료 다운로드의 경우 해당 사이트의 정책에 따라 신규 회원가입, 로그인, 유료 구매 등이 필요할 수 있습니다. 해당 사이트에서 발생하는 귀하의 모든 정보활동은 NDSL의 서비스 정책과 무관합니다.

원문복사신청을 하시면, 일부 해외 인쇄학술지의 경우 외국학술지지원센터(FRIC)에서
무료 원문복사 서비스를 제공합니다.

NDSL에서는 해당 원문을 복사서비스하고 있습니다. 위의 원문복사신청 또는 장바구니 담기를 통하여 원문복사서비스 이용이 가능합니다.

이 논문과 함께 출판된 논문 + 더보기