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마이크로칩젤 전기영동에서 충진젤 혼합물을 이용한 ORF 바이러스의 진단
Diagnosis of the ORF Virus Using a Mixture of Sieving Gel Matrixes in Microchip Gel Electrophoresis

김윤정    (전북대학교 화학과   ); 채준석    (전북대학교 생채안전성연구소   ); 강성호    (전북대학교 화학과  );
  • 초록

    시판 중인 poly(vinylpyrrolidone) (PVP)와 hydroxy ethyl cellulose (HEC) 혼합물을 충진젤 기질로 이용하여 한국 재래산양에 감염된 orf virus (ORFV)를 빠른 시간에 검출하여 진단할 수 있는 새로운 효소중합연쇄반응 (polymerase chain reaction, PCR)-마이크칩젤 전기영동법 (microchip gel electrophoresis, MGE)을 개발하였다. Orf 바이러스 B2L 유전자에서 지표-DNA인 594-bp DNA를 PCR로 증폭시킨 뒤, MGE법을 이용하여 증폭된 DNA를 분석하였다. MGE법은 64 mm 총길이(유효길이 36 mm) ${\times}$ 90 ${\mu}$ m 폭 ${\times}$ 20 ${\mu}$ m 깊이의 유리로 제작된 마이크로칩을 사용하였다. 1.0% PVP ( $M_r$ 360,000)와 1.0% HEC ( $M_r$ 250,000)의 혼합 충진젤과 277.8 V/cm의 전기장에서 4분 안에 증폭된 594-bp DNA를 분석하였다. PVP와 HEC의 혼합된 충진젤을 사용시 DNA 단편의 길이에 영향이 없이 하나의 DNA 피크를 나타내며 향상된 분리도와 이동시간의 재현성을 보여주었다. 본 PCR-MGE법은 고전적인 슬랩젤 전기영동법에 비해 약 20배 이상의 빠른 검출시간과 정량분석이 가능한 효과적인 ORFV 유전자단편 검출법이었다.


    We have developed a novel polymerase chain reaction (PCR)-microchip gel electrophoresis (MGE) method based on the sieving gel mixture of commercially available poly(vinylpyrrolidone) (PVP) and hydroxy ethyl cellulose (HEC) for the rapid detection and diagnosis of the orf virus (ORFV) from Korean indigenous goat. After amplification of 594-bp DNA fragment from the B2L gene of ORF virus, the amplicon was analyzed by the MGE separation. The glass microfluidic chip (64 mm total length (36 mm effective length) ${\times}$ 90 ${\mu}$ m width ${\times}$ 20 ${\mu}$ m depth) allowed the fast detection and diagnosis of ORFV in the mixture of 1.0% PVP ( $M_r$ 360,000) and 1.0% HEC ( $M_r$ 250,000) as a sieving matrix with better resolution and reproducibility of DNA fragments. Under the electric field of 277.8 V/cm, the 594-bp DNA was analyzed within 4 min. Compared to traditional slab gel electrophoresis, the PCR-MGE method was twenty times faster and an effective clinical method for the quantitative analysis of ORFV.


  • 주제어

    Orf 바이러스 .   혼합 충진젤 .   질병진단 .   마이크로칩젤 전기영동.  

  • 이미지/표/수식 (7)

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  • 참고문헌 (38)

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  • 이 논문을 인용한 문헌 (1)

    1. Park, Mi-Ra ; Lee, Hae-Seong ; Kang, Seong-Ho 2005. "Multiplex Polymerase Chain Reaction/Microchip Electrophoresis for the Rapid Detection of GMO in Soybean" 대한화학회지 = Journal of the Korean Chemical Society, 49(3): 255~260     

 저자의 다른 논문

  • Kang, Seong-Ho (10)

    1. 2003 "Quantitative Analysis of Seven Triazine Herbicides by On-Line Micellar Electrokinetic Chromatography-Electrospray Ionization Mass Spectrometry" Bulletin of the Korean Chemical Society 24 (9): 1319~1323    
    2. 2003 "DNA 추출없이 전혈을 이용한 PCR-전기영동법에 의한소의 타일레리아병 진단" 대한화학회지 = Journal of the Korean Chemical Society 47 (2): 127~132    
    3. 2003 "Capillary Electrophoresis of Microbes" Bulletin of the Korean Chemical Society 24 (1): 81~85    
    4. 2004 "Fast Diagnosis of Bovine Theileriosis by Whole Blood PCR and Microchip Electrophoresis" Bulletin of the Korean Chemical Society 25 (5): 757~760    
    5. 2005 "Ultra-Sensitive Real-Time Single-DNA Molecules Detection at a Fused-Silica/Water Interface Using TIRFM Technique" Bulletin of the Korean Chemical Society 26 (6): 979~982    
    6. 2005 "유전자변형 대두의 빠른 검출을 위한 복합-중합효소연쇄반응/마이크로칩 전기영동법" 대한화학회지 = Journal of the Korean Chemical Society 49 (3): 255~260    
    7. 2005 "인간비만 관련 유전자의 분석을 위한 단일가닥구조다형성/모세관전기영동법" 대한화학회지 = Journal of the Korean Chemical Society 49 (6): 537~545    
    8. 2005 "Femtomol Single-DNA Molecules Analysis by Electro Field Strength in a Microfluidic Chip Using TIRFM" Bulletin of the Korean Chemical Society 26 (2): 315~318    
    9. 2006 "Single-Strand Conformation Polymorphism Analysis by Microchip Electrophoresis for the Rapid Detection of Point Mutation in Human Obesity Gene" Bulletin of the Korean Chemical Society 27 (9): 1346~1352    
    10. 2006 "Analysis of Korean Infertile Males by PDMS Microchip Gel Electrophoresis" Bulletin of the Korean Chemical Society 27 (8): 1239~1242    

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