본문 바로가기
HOME> 논문 > 논문 검색상세

논문 상세정보

낮은 농도의 Hypoxanthine과 FSH가 미성숙난자의 체외성숙에 미치는 영향
The Effect of Low Concentrated Hypoxanthine and FSH in 10% FBS Supplemented Medium on Immature Oocyte in vitro Maturatio

한혁동   (연세대학교 원주의과대학 산부인과학교실  ); 임창교   (21세기 산부인과  ); 염현식   (연세대학교 원주의과대학 산부인과학교실  ); 현나영   (연세대학교 원주의과대학 산부인과학교실  ); 이지향   (연세대학교 원주의과대학 산부인과학교실  ); 홍미   (연세대학교 원주의과대학 산부인과학교실  );
  • 초록

    목 적: Hypoxanthine (Hx)과 FSH가 미성숙난자의 배양에 미치는 영향을 관찰하기 위해 미성숙난자를 배양하여 GVBD, MII기 발생률을 비교 관찰하였다. 연구방법: 단순배양액인 BSAL-XI-HTF 배양액을 사용하여 (1) 0.3% BSA mBASAL-XI-HTF (0.3% BSA 배양액), (2) 0.1 IU/ml FSH를 첨가한 0.3% BSA mBASAL-XI-HTF (FSH 0.3% BSA 배양액), (3) 10% FBS mBASAL-XI-HTF (10% FBS 배양액), (4) 0.1 IU/ml FSH를 첨가한 10% FBS mBASAL-XI-HTF (FSH 10% FBS 배양액)의 4종류의 배양액을 만들었고, 각 종류의 배양액에서 생쥐 난구세포로 둘러싸인 미성숙난자의 성숙을 3, 6, 18시간별로 비교 관찰하였다. 각 배양액에 1 mM, 2 mM, 4 mM 농도의 미성숙난자성숙억제제인 Hx을 섞어 난자의 성숙억제양상을 관찰하였고 GVBD와 MII기 발생률을 비교 관찰하였다. 결 과: Hx을 첨가하지 않은 4종류의 배양액에서 미성숙난자의 자연성숙은 3시간 내에 대부분 GVBD가 발생하였고 MII기로의 발육은 6시간 이후 발생하였다. 18시간 후 각 군의 배양에서 모두 유사한 GVBD 발생률을 보였다. 1 mM, 2 mM, 4 mM Hx 농도의 0.3% BSA 배양액과 10% FBS 배양액에서 난자의 성숙억제양상을 비교해 보면 4 mM 농도의 Hx 배양액에서 18시간 동안 완전한 성숙억제를 보였다. 2 mM 농도의 Hx 배양액에서도 18시간 배양까지 억제를 보였으나 4 mM 농도의 Hx 배양액보다 작은 난자성숙억제양상을 보였다. 1 mM 농도의 Hx 배양액에서는 모두 난자성숙억제를 보이지 못했다. FSH를 첨가한 배양액에서는 2 mM 농도의 Hx 뿐만 아니라 1 mM 농도의 Hx 첨가에서도 초기 3시간까지 GVBD 성숙이 억제되었다. 또 같은 농도의 Hx을 함유하고 FSH를 첨가하지 않은 배양액에 비해 FSH를 첨가한 배양액에서 3시간, 6시간 동안 GVBD 발생을 더 억제하였다. 그러나 18시간 배양 후 난자성숙이 회복됨을 보였다. 이 결과로 FSH가 배양초기에 난자성숙을 억제하나 후기에는 성숙을 촉진함을 알 수 있었다. 18시간 후 MII기발육은 4 mM 농도의 Hx을 함유한 모든 배양액에서 낮은 발생률을 보였고, FSH를 함유한 10% FBS 배양액에 1 mM, 2 mM의 낮은 농도의 Hx을 첨가한 배양액은 다른 배양액에 비해 통계학적으로 높은 MII기 발생률을 보였다. 결 론: 본 실험에서 낮은 농도의 Hx과 FSH는 FBS를 함유한 배양액에서 미성숙난자의 초기배양 동안 성숙을 억제한 후 MII기 성숙을 촉진함을 알 수 있었다.


    Objective: We examined the effect of different culture media on oocyte maturation. Methods: Four groups of media, (1) 0.3% BSA mBASAL-XI-HTF, (2) 0.3% BSA mBASAL-XI-HTF with FSH, (3) 10% FBS mBASAL-XI-HTF and (4) 10% FBS mBASAL-XI-HTF with FSH were prepared. Mouse cumulus enclosed oocytes (CEOs) were incubated in each group of medium. Hypoxanthine (Hx) was mixed to each group of medium in increasing concentrations of 1 mM, 2 mM and 4 mM. CEOs were incubated and assessed for GVBD and MII development at 3, 6, 18 hours. Results: CEOs maturation to GVBD was seen in all four groups during 3 hours of culture, however MII stage of oocytes was seen after 6 hours. Complete arrest of GV stage in 4 mM Hx media without FSH and partial arrest in 2 mM Hx media without FSH were seen during 18 hours of culture but development was not suppressed in 1 mM Hx media without FSH. More prominent GVBD suppression was noted at early 3, 6 hours culture in 1 mM, 2 mM Hx media with FSH compared to media without FSH. But the suppression was recovered at 18 hours. This result suggests that low concentrated Hx and FSH supplemented media can suppress CEOs maturation during early culture period but recovery is resumed or even stimulated at late period. 1 mM, 2 mM Hx 10% FBS medium with FSH had significantly higher rates of MII development (71.7%, 66.7%) at 18 hours compared to other media. Conclusion: Our results show that low concentrated Hx and FSH supplemented 10% FBS media may stimulate MII development after an initial inhibitory effect.


  • 주제어

    미성숙난자 .   체외성숙 .   난포자극호르몬.  

  • 참고문헌 (19)

    1. Eppig JJ, Schultz RM, O'Brien M, Chesnel F. Relationship between the developmental programs controlling nuclear and cytoplasmic maturation of mouse oocytes. Dev Biol 1994; 164: 1-9 
    2. Jee BC, Chen HY, Chian RC. Effect of a phosphodiesterase type 3 inhibitor in oocyte maturation medium on subsequent mouse embryo development. Fert Steril 2009; 91(Suppl 5): 2037-42 
    3. Eppig JJ, Downs SM. The effect of Hypoxanthine on mouse oocyte growth and development in vitro: maintenance of meiotic arrest and gonadotropin induced oocyte maturation Dev Biol 1897; 119: 313-21 
    4. Wehrend A, Meinecke B. The meiotic cell cycle in oocytes of domestic animals Reprod Domest anim 1998; 33: 289-97 
    5. Edwards RG. Maturation in vitro of human ovarian oocytes. Lancet 1965; 6: 926-9 
    6. Chian RC. Laboratory aspects of IVM treatment. In: Tan LT, Chian RC, Buckett WM, editors. In-vitro matuation of human oocytes: basic science to clinical applications. London: Informa Healthcare; 2007. 273-93 
    7. 지희준, 황영희, 이훈택, 정길생. Purine이 생쥐 미성숙 난자의 핵성숙에 미치는 영향 II. 미성숙난자의 제1극체 방출과 생존성에 미치는 Purine의 효과. 한국동물번식학회지 1993; 17: 85-92 
    8. Cha KY, Koo JJ, Ko JJ, Choi DH, Han SY, Yoon TK. Pregnancy after in vitro fertilization of human follicular oocytes collected from nonstimulated cycles, their culture in vitro and their transfer in a donor oocyte program. Fertil Steril 1991; 55: 109-13 
    9. Faerge I, Terry B, Kalous J, Wahl P, Lessl M, Ottesen JL, et al. Resumption of meiosis induced by meiosis-activating sterol has a different signal transduction pathway than spontaneous resumption of meiosis in denuded mouse oocytes culture in vitro. Biol Reprod 2001; 65: 1751-8 
    10. Eppig JJ, Viveros MM, Bivens CM, Fuente RDL. Regulation of mammalian oocyte maturation. In: Leung PCK, Adashi EY, editors. The ovary. 2nd ed. Burlington: Elsevier Academic Press; 2004. p.113-29 
    11. Fan HY, Sun QY. Involvement of mitogen-activated protein kinase cascade during oocyte maturation and fertilization in mammals. Bio Repro 2004; 70: 535-47 
    12. Downs SM, Chen J. EGF-like peptides mediate FSH-induced maturation of cumulus cell-enclosed mouse oocytes. Mol Reprod Dev 2008; 75: 105-14 
    13. Mehlmann LM. Stops and starts in mammalian oocytes: recent advances in understanding the regulation of meiotic arrest and oocyte maturation. Reproduction 2005; 130: 791-9 
    14. Dekel N. Protein phosphoryration/dephosphorylation in the meiotic cell cycle of mammalian oocytes. Rev Reprod 1996; 1: 82-8 
    15. Quinn P, Kerin JF, Warnes GM. Improved pregnancy rate in human in vitro fertilization with the use of a medium based on the composition of human tubal fluid. Fertil Steril 1985; 44: 493-8 
    16. Downs SM, Coleman DL, Ward-Bailey PF, Eppig JJ. Hypoxanthine is the principal inhibitor of murine oocyte maturation in low molecular weight fraction of porcine follicular fluid. Proc Natl Acad Sci U S A 1985; 82: 454-8 
    17. Pincus G, Enzmann EV. The comparative behavior of mammalian eggs in vivo and in vitro: I. The activation of ovarian eggs. J Exp Med 1935; 62: 665-75 
    18. Eppig JJ, Ward-Bailey PF, Coleman DL. Hypoxanthine and adenosine in murine ovarian follicular fluid: concentration and activity in maintaining oocyte meiotic arrest. Biol Reprod 1983; 33: 1041-9 
    19. Park JY, Su YQ, Ariga M, Law E, Jin SL , Conti M. EGF-like growth factors as mediators of LH action in the ovulatory follicle. Science 2004; 303: 682-4 

 저자의 다른 논문

  • 한혁동 (2)

    1. 1993 "생쥐초기배아 세포기가 동결보존 및 융해후 생존에 미치는 영향" 大韓不妊學會雜誌 = Korean journal of the fertility and sterility 20 (2): 161~164    
    2. 2001 "생쥐 1-세포기 수정란의 동결방법에 있어서 초자화동결과 완만동결의 비교" 대한불임학회지 = Korean journal of fertility and sterility 28 (3): 191~198    

 활용도 분석

  • 상세보기

    amChart 영역
  • 원문보기

    amChart 영역

원문보기

무료다운로드
  • NDSL :
  • 대한생식의학회 : 저널
유료다운로드
  • 원문이 없습니다.

유료 다운로드의 경우 해당 사이트의 정책에 따라 신규 회원가입, 로그인, 유료 구매 등이 필요할 수 있습니다. 해당 사이트에서 발생하는 귀하의 모든 정보활동은 NDSL의 서비스 정책과 무관합니다.

원문복사신청을 하시면, 일부 해외 인쇄학술지의 경우 외국학술지지원센터(FRIC)에서
무료 원문복사 서비스를 제공합니다.

NDSL에서는 해당 원문을 복사서비스하고 있습니다. 위의 원문복사신청 또는 장바구니 담기를 통하여 원문복사서비스 이용이 가능합니다.

이 논문과 함께 이용한 콘텐츠
이 논문과 함께 출판된 논문 + 더보기