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한국미생물·생명공학회지 = Korean journal of microbiology and biotechnology v.38 no.2, 2010년, pp.158 - 162  
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Thermus thermophilus HJ6 유래 N-말단 결실 DNA Polymerase의 정제 및 특성
Purification and Characterization of the N-terminally Truncated DNA Polymerase from Thermus thermophilus HJ6

전숭종    (동의대학교 생명공학과   ); 서민호    (동의대학교 생명공학과  );
  • 초록

    고온균 Thermus thermophilus HJ6 유래의 N-말단 결실 Tod polymerase( $\Delta$ Tod polymerase)는 온도 감수성 프로모터 (lambda pR and pL)를 포함하는 pJLA503 벡터를 이용하여 대장균에서 발현하였다. N-말단 250개 아미노산이 제거된 $\Delta$ Tod polymerase는 5' $\rightarrow$ 3' exonuclease 활성은 없어지고 DNA 중합반응의 활성은 그대로 유지되었다. $\Delta$ Tod polymerase는 $MgCl_2$ 의 존재 하에서 매우 효율적으로 역전사 반응과 PCR 반응을 수행하였다. 또한 $\Delta$ Tod polymerase는 one-step RT-PCR 반응에서 Taq polymerase 보다 높은 cDNA 증폭 효율을 나타내었다.


    The gene encoding N-terminally truncated Tod polymerase ( $\Delta$ Tod polymerase) from Thermus thermophilus HJ6 was expressed in Escherichia coli under the control of the lambda pR and pL tandem promoters on the expression vector pJLA503. The N-terminal domain (250 amino acids) of Tod polymerase was removed without significant effect on enzyme activity and stability, while no 5' $\rightarrow$ 3' exonuclease activity was detected. The $\Delta$ Tod polymerase was verified to possess very efficient reverse transcriptase (RT) activity in the presence of $MgCl_2$ . The cDNA can also be amplified in the polymerase chain reaction (PCR) with this mutant enzyme. The $\Delta$ Tod polymerase was exhibited higher activity than the Taq polymerase in a one-step RT-PCR.


  • 주제어

    DNA polymerase .   RT-PCR .   Thermus thermophilus .   PCR .   exonuclease.  

  • 참고문헌 (13)

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    1. 1998 "Effect of C- or D-Domain Deletion on Enzymatic Properties of Cyclodextrin Glucanotransferase from Bacillus stearothermophilus NO2" Journal of microbiology and biotechnology 8 (2): 152~157    
    2. 2005 "Saccharomyces cerevisiae에서 Paenibacilius macerans 유래 cycloinulooligosaccha-ride fructanotransferase의 발현" 생명과학회지 = Journal of life science 15 (3): 317~322    
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    4. 2005 "Production of Soluble Human Granulocyte Colony Stimulating Factor in E. coli by Molecular Chaperones" Journal of microbiology and biotechnology 15 (6): 1267~1272    
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    6. 2006 "Effect of Molecular Chaperones on the Soluble Expression of Alginate Lyase in E. coli" Biotechnology and bioprocess engineering 11 (5): 414~419    
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  • 서민호 (1)

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