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Spectrochimica acta. Part A, Molecular and biomolecular spectroscopy v.174, 2017년, pp.189 - 194   SCI SCIE
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Spectrometric assay for horseradish peroxidase activity based on the linkage of conjugated system formed by oxidative decarboxylation

Yamaguchi, Masaki (Corresponding author. ) ; Sato, Shingo ;
  • 초록  

    Abstract Horseradish peroxidase (HRP)-catalyzed oxidation of 2,2-bis[3-acethylfilicinic acid-5-yl]acetic acid (BAFA, 4 ) produces Dehydro-3,3’-diacetyl-5,5’-methylenedifilicinic acid (DDMF, 3). A new photometric hydrogen donor ( 4 ) for peroxidase (POD)-catalyzed oxidation was demonstrated to be potentially useful for spectrocolorimetric and spectrofluorometric determination of HRP. Our developed colorimetric (absorption at 483nm) and fluorometric (emission at 529nm) systems both gave a linear calibration curve for HRP (y=0.0025×+0.0237; R 2 = 0.9997, and y=0.241×+3.194; R 2 = 0.9914, respectively) in the same concentration range of 9.1×10 −8 –1.1×10 −6 nmol/L. The calculated K m and V max values of 5.10×10 −4 M and 5.13×10 −6 M/min, respectively. The results indicate that the quantification of HRP using BAFA 4 as hydrogen donor is possible. Highlights HRP-catalyzed oxidative decarboxylation produced a fluorescent yellow dye. Relationship of ABS or fluorescence vs. HRP concentration showed a good linearity. Quantification of HRP using BAFA 4 as hydrogen donor is possible. Graphical Abstract Colorimetric (absorption at 483nm) and fluorometric (emission at 529nm) determination of HRP using BAFA as a hydrogen donor both gave a linear calibration curve (y=0.0025×+0.0237; R 2 = 0.9997, y=0.241×+3.194; R 2 = 0.9914) in the same range of 1.4–12U/L. [DISPLAY OMISSION]


  • 주제어

    Carthamin-precursor model .   Oxidative decarboxylation .   Horseradish peroxidase .   Spectrocolorimetry .   Spectrofluorometry.  

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