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Food microbiology v.70, 2018년, pp.113 - 119   SCI SCIE
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Identification of Brucella genus and eight Brucella species by Luminex bead-based suspension array

Lusk Pfefer, Tina S. (Corresponding author. U.S. Food and Drug Administration, Center for Food Safety and Applied Nutrition, 5001 Campus Drive, HFS-711, College Park, MD 20740, United States. ) ; Timme, Ruth ; Kase, Julie A. ;
  • 초록  

    Abstract Globally, unpasteurized milk products are vehicles for the transmission of brucellosis, a zoonosis responsible for cases of foodborne illness in the United States and elsewhere. Existing PCR assays to detect Brucella species are restricted by the resolution of band sizes on a gel or the number of fluorescent channels in a single real-time system. The Luminex bead-based suspension array is performed in a 96-well plate allowing for high throughput screening of up to 100 targets in one sample with easily discernible results. We have developed an array using the Bio-Plex 200 to differentiate the most common Brucella species: B. abortus , B. melitensis , B. suis, B. suis bv5, B. canis , B. ovis , B. pinnipedia , and B. neotomae, as well as Brucella genus. All probes showed high specificity, with no cross-reaction with non- Brucella strains. We could detect pure DNA from B. abortus , B. melitensis , and genus-level Brucella at concentrations of ≤5 fg/μL. Pure DNA from all other species tested positive at concentrations well below 500 fg/μL and we positively identified B. neotomae in six artificially contaminated cheese and milk products. An intra-laboratory verification further demonstrated the assay's accuracy and robustness in the rapid screening (3–4 h including PCR) of DNA. Highlights A PCR-based Luminex assay to speciate Brucella is presented. The assay targets eight Brucella species and genus-level Brucella. B. neotomae was detected in inoculated cheese and milk using the assay. This accurate, high-throughput assay array is completed in 3–4 h. Bacterial isolates or DNA-extracted food samples can be screened with this assay.


  • 주제어

    Brucella DNA detection .   Bio-plex 200 .   High-throughput .   Brucella speciation.  

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