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보고서 상세정보

한국 혈우병 A 환자의 항체 생성에 관한 연구
Characterization of biological factors underlying inhibitor development in Korean patients with hemophilia A

  • 사업명

    ② 생물학적제제 안전평가 연구

  • 과제명

    한국 혈우병 A 환자의 항체 생성에 관한 연구

  • 주관연구기관

    삼성서울병원
    Samsung Seoul Hospital

  • 연구책임자

    김희진

  • 보고서유형

    최종보고서

  • 발행국가

    대한민국

  • 언어

    한국어

  • 발행년월

    2009-11

  • 과제시작년도

    2009

  • 주관부처

    식품의약품안전청

  • 사업 관리 기관

    식품의약품안전청
    Korea Food & Drug Administration

  • 등록번호

    TRKO201000000450

  • 과제고유번호

    1475004690

  • 키워드

    응고인자.혈우병.항체.돌연변이.Coagulation factor.hemophilia.inhibitor.mutation.Human Leukocyte Antigen.

  • DB 구축일자

    2013-04-18

  • 초록 


    Hemophilia A (HA) is caused by a mutation in the F8 gene on X chromosome. Inhibitor development (ID) is one of the most deleterio...

    Hemophilia A (HA) is caused by a mutation in the F8 gene on X chromosome. Inhibitor development (ID) is one of the most deleterious complications in HA, increasing not only the mortaility of mortality of patients but also the social economic burden, due to the high cost of treatment. This study was performed to delineate the risk factors to develop inhibitor in Korean patients with severe HA to obtain evidence to optimize prevention/treatment plans and to establish a database for the purpose. One of the well-established risk factors of ID is the type of mutation. Since only inv(22)/inv(1) tests have been performed for direct molecular diagnosis in HA, we additionally performed direct sequencing analysis followed by exon dosage (or copy number) mutation tests by introducing the multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA) technique. As a result, we observed that 75% of patients with multi-domain deletion mutations detected by MLPA had high-titer inhibitors, In addition, we confirmed the copy number mutation on high-resolution SNP (single nucleotide polymorphism) array platform. Secondly, we performed high-resolution full HLA (Human Leukocyte Antigen) typing in the 100 patients. This is a test with high-cost and complexity, and we could not observe any significant genotype in association with ID. However, development of a new high-throughput, array-based platform in specific consideration of the HLA profile of Koreans will facilitate to uncover high-risk or protective HLA genotypes. Epitope mapping was performed in 23 patients with inhibitor, and the epitope in 7 patients were successfully mapped to A2 or C2 domains. This was the first result of epitope mapping in HA in Korea, but further studies are needed to overcome the effects of the titer of inhibitors, domains of epitopes other than A2/C2, and post-translational modification. Lastly, we established a comprehensive DB with clinical and laboratory findings and results of the aforementioned special esoteric tests for risk stratification. In summary, this is the first study on ID in Korean patients with HA with a focus on the molecular diagnostic strategies for mutation detection and HLA typing, in addition to epitope mapping. With growing information for genotype-phenotype correlations from the DB we developed and by taking advantage of high-throughput genome-wide platforms, we can participate in international collaborative studies and develop an optimized diagnostic and management strategy for severe HA in Korea in the near future.


    본 과제는 대표적 멘델유전성 출혈질환인 A형 혈우병에서 항체발생에 관한 연구이다. A형 혈우병은 F8 유전자의 돌연변이에 의해 발생하며, 중증의 경우 항체가 생성되면 환자의 morbidity와 mortality가 증가할 뿐 아니라 ...

    본 과제는 대표적 멘델유전성 출혈질환인 A형 혈우병에서 항체발생에 관한 연구이다. A형 혈우병은 F8 유전자의 돌연변이에 의해 발생하며, 중증의 경우 항체가 생성되면 환자의 morbidity와 mortality가 증가할 뿐 아니라 고가의 치료를 필요로 하므로 사회비용적 문제가 발생하게 된다. 따라서, 항체 생성의 고위험인자에 대한 evidence를 확보하여 선별적으로 예방/치료하는 것이 필요하다. 본 연구에서는 첫째, 한국인 중증 A형 혈우병환자 100명을 대상(27명의 항체양성환자 포함)으로 선진국에서 A형 혈우병에서 항체생성과 관계되는 것으로 알려진 F8 유전자의 질환돌연변이 및 면역기능을 담당하는 HLA(Human Leukocyte Antigen)에 대한 분자유전학적 진단기법을 setting하여 data를 얻었고, 둘째, 항체양성환자들의 항체 epitope를 mapping 하였으며, 셋째, 이러한 특수검사결과 및 임상적 및 항체관련 및 기타 기본 검사실적 소견을 담은 포괄적 DB를 구축하였다. 돌연변이진단 분자유전기법으로는 기존의 inv(22)/inv(1)의 진단에 추가하여 직접염기서열분석법과 exon dosage (혹은 copy number) mutation을 쉽게 진단할 수 있는 multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA) 기법을 적용하였고, 또한 이를 통하여 검출된 copy number mutation을 high-resolution SNP array로 확인할 수 있음을 보였다. 결과적으로 외국의 보고와 같이 MLPA/SNP array로 진단 가능한 multi-domain deletion 돌연변이 환자들은 75%에서 고역가 항체를 발생하는 것으로 확인되어, 주요한 분자유전학적 고위험인자로 확인되었다. 그 외 splicing mutation이 항체 생성 저위험인자라는 소견을 뒷받침하는 결과 등을 얻었으나, 대상환자의 수가 충분하지 못하여 definite한 고위험인자임을 확인하는 것은 어려움이 있었다. HLA typing은 소위 high-resolution typing, 즉 DNA-based된 유전형으로 진단하는 알고리듬을 사용하였는데, 비용 및 ambiguous genotype을 줄이기 위하여 한국인에서의 HLA 빈도를 고려한 array-based chip 등의 새로운 high-throughput platform의 도입을 통하여 다수 환자의 data를 얻어야 고위험군의 선별이 가능할 것으로 생각되었다. Epitope mapping은 총 23명에서 시행되어 7명에서 A2/C2 domain을 진단하였으며, 항체의 역가, domain에 따른 발현시스템의 최적화, post-glycosylation의 고려 등의 해결점이 남았다. 정리하면, 본 연구를 통하여 국내에서는 최초로 A형 혈우병 환자에서 comprehensive한 분자유전진단법을 도입한 workup 지침과 함께 고난이도의 high-resolution HLA typing과 epitope mapping을 구현하였다. 이를 포함하는 DB의 지속적인 data 관리와 high-throughput genome analysis를 활용하여 앞으로 국제적인 협력연구를 통한 고위험군관리체계의 확립이 가능할 것으로 생각된다.


  • 목차(Contents) 

    1. 표지...1
    2. 제출서...2
    3. 제출문...3
    4. 목차...4
    5. I. 총괄연구개발과제 요약문...6
    6. 1. 국문요약문...6
    7. 2. Summary...8
    8. II. 총괄연구개발과제 연구결과 ...10
    9. 제1장 총괄연구개발과제의 목적 및 필요성 ...10<...
    1. 표지...1
    2. 제출서...2
    3. 제출문...3
    4. 목차...4
    5. I. 총괄연구개발과제 요약문...6
    6. 1. 국문요약문...6
    7. 2. Summary...8
    8. II. 총괄연구개발과제 연구결과 ...10
    9. 제1장 총괄연구개발과제의 목적 및 필요성 ...10
    10. 1절 총괄연구개발과제의 목표...10
    11. 2절 총괄연구개발과제의 목표달성도...13
    12. 3절 총괄국내·외 기술개발 현황...14
    13. 4절 총괄연구개발과정에서 수집한 국외과학기술정보...18
    14. 제2장 총괄연구개발과제의 내용 및 방법 ...22
    15. 1절 연구의 scheme 및 내용/방법적 결과물의 요약...22
    16. 2절 항체생성 위험인자로서 돌연변이를 진단하기 위한 직접분자유전검사 setting ...23
    17. 3절 항체생성 위험인자로서 gene dosage mutation의 분자유전학적 진단기법 setting Multiplex ligation-dependent probe amplification(MLPA)...25
    18. 4절 항체항성 위험인자로서 high-resolution HLA(Human Leukocyte Antigen) typing 기법 setting ...27
    19. 5절 항체 양성 환자에서 항체의 Epitope mapping...28
    20. 6절 A형 혈우병 환자의 포괄적 database(DB) 구축...30
    21. 7절 한국인에서의 factor VIII activity의 참고범위 설정...31
    22. 8절 정상 factor VIII activity가 확인된 대조권 DNA 확보...32
    23. 9절 고역가항체 환자에서의 SNP array를 이용한 large deletion mutation의 진단 ...33
    24. 제3장 총괄연구개발과제의 최종결과 및 고찰 ...34
    25. 1절 한국인 중증 A형 혈우병환자 100명의 질환원인 돌연변이...34
    26. 2절 한국인 중증 A형 혈우병환자 100명의 high-resolution HLA type...35
    27. 3절 한국인 항체양성 중증 A형 혈우병환자에서의 항체 epitope...39
    28. 4절 한국인에서의 factor VIII activity 의 참고범위 및 이를 통해 얻은 control DNA set...40
    29. 5절 한국인 중증 A형 혈우병환자의 포괄적 DB 구축...41
    30. 6절 항체발생 고위험군 판정을 위한 분자유전진단지침 제시...42
    31. 7절 본 연구를 수행함에 있어 한계점에 대한 고찰...43
    32. 8절 앞으로의 연구 방향에 대한 고찰...44
    33. 제4장 총괄연구개발과제의 연구성과 ...45
    34. 1절 총괄활용성과...45
    35. 2절 총괄활용계획...48
    36. 제5장 총괄주요연구 변경사항 ...50
    37. 제6장 총괄참고문헌 ...51
    38. 제7장 총괄첨부서류 ...54
    39. III. 제(O)세부연구개발과제 연구결과 ...56
    40. 제1장 세부연구개발과제의 요약문 ...57
    41. 제2장 세부연구개발과제의 목적 ...59
    42. 2.1 세부연구개발과제의 목적...59
    43. 2.2 세부연구개발과제의 목표달성도...59
    44. 제3장 세부연구개발과제의 내용 및 방법 ...59
    45. 제4장 세부연구개발과제의 결과 및 고찰 ...59
    46. 제5장 세부참고문헌 ...59
    47. 첨부서류 A ...60
    48. 첨부서류 B ...62
    49. 첨부서류 C ...65
    50. 첨부서류 D ...67
    51. 첨부서류 E ...74
  • 참고문헌

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