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보고서 상세정보

외래성 바이러스 중 아데노부속 바이러스(AAV) 검출시험법 연구
Study on testing method for adeno-associated virus(AAV) of adventitious virus

  • 사업명

    생물의약품 안전관리

  • 과제명

    외래성 바이러스 중 아데노부속 바이러스(AAV) 검출시험법 연구

  • 주관연구기관

    식품의약품안전평가원

  • 연구책임자

    박윤주

  • 참여연구자

    최금숙   노항식   김희정   김남희   정지원   오일웅   최예진   김관수   서수진  

  • 보고서유형

    최종보고서

  • 발행국가

    대한민국

  • 언어

    한국어

  • 발행년월

    2009-12

  • 과제시작년도

    2009

  • 주관부처

    식품의약품안전청

  • 사업 관리 기관

    식품의약품안전청
    Korea Food & Drug Administration

  • 등록번호

    TRKO201000014632

  • 과제고유번호

    1475004682

  • 키워드

    유전자치료제.아데노부속 바이러스.검출한계.

  • DB 구축일자

    2013-04-18

  • 초록 


    An adenovirus is the most commonly used vector as gene therapy product, in order to treat or cure the various diseases. During ma...

    An adenovirus is the most commonly used vector as gene therapy product, in order to treat or cure the various diseases. During manufacturing process, Adenovirus is often contaminated with adeno-associated virus(AAV), whose replication as well as proliferation is solely dependent on helper virus, that is, adenovirus. So far, 11 different serotypes of AAV are known to exist(AAV1-AAV11), though some of them do not infect human. AAV-contamination has been an issue in the field of gene therapy, since the manufacturing efficiency of Ad is lowered by 100-fold due to AAV, on top of reducing the replication by 10-fold. Thus, it has been emphasized that AAV somehow needs to be controlled or their absence should be validated with reliable methods for the high quality of product. While manufacturers or contract-manufacturing organization(CMO) has developed their own assay to detect AAV, standardized one has not been established. Even more, previously developed assay had the limitation to detect only a few serotypes, though being claimed to cover all the serotypes, which is not yet proven. In this study, we designed the universal primers for detection of various serotypes AAV for establishing standard protocol. These primers detect AAV 1-8, 10, 11 theoretically, and detection of AAV 1~5 are confirmed. We also verify the detection limit is $10^{1}$ copies in standard protocol with these primers through quantitative PCR. This standard protocol may be reference data for detection method of AAV. This assay not only provides the advantage of detecting various types of AAVs with a single PCR, but also is made to shorten the overall time by eliminating the step of DNA extraction. Following assay validation and further collaborative study, it is expected that this assay will be circulated to manufacturers or researchers for its use.
    As development of biotechnology, it is needed to control the effect of living modified organism(LMO) on human health and environment. For this reason, the draft guideline was issued about consideration at development of LMO medicinal products regarding environmental assessment and we expect that it may help development of LMO medicinal products.


    다양한 질환의 치료를 목적으로 현재까지 가장 널리 사용되고 있는 유전자치료제 벡터는 아데노 바이러스이다. 아데노바이러스 생산세포주에는 아데노부속 바이러스(adeno-associated virus, AAV)가 오염 될 수 있는데, A...

    다양한 질환의 치료를 목적으로 현재까지 가장 널리 사용되고 있는 유전자치료제 벡터는 아데노 바이러스이다. 아데노바이러스 생산세포주에는 아데노부속 바이러스(adeno-associated virus, AAV)가 오염 될 수 있는데, AAV는 단독으로 복제를 할 수 없으며 아데노바이러스 등의 보조바이러스(helper virus)와 함께 감염되었을 때 복제, 증식할 수 있는 결함 바이러스이다. AAV의 혈청형(serotype)은 현재까지 11개(AAV1-AAV11)가 발견되었으며, 아데노바이러스 생산 시 AAV가 오염된 경우 아데노바이러스 생산율은 100배 감소하고, 아데노바이러스 DNA 복제는 10배 정도 감소됨이 보고된바 있다. 아데노바이러스 벡터 유전자치료제에 대한 제조 및 품질관리에 있어 외래성 아데노부속 바이러스의 관리가 필요하지만 아데노부속 바이러스 검출시험에 대한 표준화된 시험법이 국내ㆍ외적으로 확립되어있지 않은 상태이다. 본 연구에서는 표준화된 시험법을 마련하기 위해 다양한 혈청형의 AAV를 검출할 수 있는 공통 primer를 제작하였다. 이는 AAV 1-8, 10, 11에 공통적으로 결합할 수 있도록 제작하였으며, rep 유전자 부분을 target으로 하였다. 또한 AAV 1-5 혈청형을 이용하여 PCR 수행한 결과 모두 검출 가능함을 확인하였고, 정량 PCR을 이용해 이 primer를 이용한 시험법의 검출한계가 약 $10^{1}$ copies 정도임을 확인하였다. 이번 연구를 통해 마련된 검출법은 다양한 AAV를 동시에 검출할 수 있는 장점뿐만 아니라, 기존에 사용되었던 방법에 비해 DNA 추출단계를 생략하여 검출시험 시간을 단축시켰다는 점에서 의의가 있다. 본 연구결과를 바탕으로 향후 재현성 확인 등의 추가 연구를 거쳐 시험법으로 확립하고, 제조사나 관련 연구기관에 활용토록 기술 확산을 도모할 것이다.
    한편, 생명공학 기술의 발달로 AAV 등 바이러스벡터를 유전자치료제 임상시험에 시도하는 사례가 점차적으로 늘어나고 있다. 임상시험에 사용되는 벡터가 환자 이외의 환경에 노출 될 경우, 즉 환자의 가족, 의료진, 임상시험 종사자 등 주변사람이나 환경에 미칠 영향에 대한 사전평가와 철저한 예방기준의 마련이 요구된다. 이에 따라, 임상시험에 사용되는 바이러스벡터 등 LMO의 위해성 평가을 위하여 「임상시험용 유전자치료제 환경 위해성 평가지침(안)」을 마련하여 발간하였으며, LMO의약품 유전자치료제 안전한 임상시험 수행에 참고가 될 수 있는 자료로 활용되기를 바란다.


  • 목차(Contents) 

    1. 표지 ...1
    2. 요약문 ...3
    3. Summary ...4
    4. 목차 ...5
    5. I. 연구개발과제 연구결과 ...6
    6. 제1장 연구개발과제의 개요 ...6
    7. 제1절 연구개발과제의 목표 ...6
    8. 제2절 연구개발과제의 필요성 ...6
    9. 제2장 연구개발과제의...
    1. 표지 ...1
    2. 요약문 ...3
    3. Summary ...4
    4. 목차 ...5
    5. I. 연구개발과제 연구결과 ...6
    6. 제1장 연구개발과제의 개요 ...6
    7. 제1절 연구개발과제의 목표 ...6
    8. 제2절 연구개발과제의 필요성 ...6
    9. 제2장 연구개발과제의 국내.외 연구개발 현황 ...9
    10. 제1절 국외 연구개발 현황 ...9
    11. 제2절 국내 연구개발 현황 ...10
    12. 제3장 연구개발과제의 연구수행 내용 및 결과 ...11
    13. 제1절 현재 사용중인 AAV 검출 시험법 ...11
    14. 제2절 AAV 검출시험 ...12
    15. 제3절 LMO 환경위해성 관리방안 마련 ...21
    16. 제4장 연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ...23
    17. 제5장 연구개발과제의 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ...24
    18. 제6장 연구개발과제의 연구개발결과 활용계획 ...25
    19. 제1절 활용성과 ...25
    20. 제2절 활용계획 ...25
    21. 제7장 참고문헌 ...27
    22. 제8장 첨부서류 ...29
  • 참고문헌

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