본문 바로가기
HOME> 보고서 > 보고서 검색상세

보고서 상세정보

살모넬라를 이용한 박테리아 유전자 전달시스템의 효력시험법연구
Research about efficiency test of gene delivery system using Salmonella

  • 사업명

    생물생명공학의약품안전관리

  • 과제명

    Salmonella를 이용한 박테리아 유전자전달 시스템의 효력시험법 연구

  • 주관연구기관

    고려대학교 산학협력단

  • 연구책임자

    박용근

  • 보고서유형

    최종보고서

  • 발행국가

    대한민국

  • 언어

    한국어

  • 발행년월

    2009-02

  • 과제시작년도

    2008

  • 주관부처

    식품의약품안전청

  • 사업 관리 기관

    식품의약품안전청
    Korea Food & Drug Administration

  • 등록번호

    TRKO201000014876

  • 과제고유번호

    1475004027

  • 키워드

    살모넬라.유전자치료.항암제.Salmonella.Gene therapy.anti-tumor agents.

  • DB 구축일자

    2013-04-18

  • 초록 


    This research project to the application of gene therapy is a recent study with the Salmonella microorganisms as a another vector...

    This research project to the application of gene therapy is a recent study with the Salmonella microorganisms as a another vector gene delivery, to evaluate the efficacy of gene therapy using recombinant Salmonella, to understand and to present a guidelines for research purposes.
    As a first step toward this goal, we are established that development of Salmonella Type genes delivery, analysis about quality, a efficacy of various dosage and constuction of bacterial gene delivery vector, measurements to provide information through the bio-distribution for pathway.
    As provided in this research project, we are developed 15 strain for expression of material and gene delivery with salmonella type. we use with strains of the two types, one is microbial strain expressing gene in prokaryotic cell and inducing protein expression in the body. the other is microbial strain expressing gene in eukaryotic cell and containing plasmid. these microbial strain are induced protein expression by secreated plasmid to necrosis of salmonella in the body.
    In this project, protein expression, invasion assay and cytotoxicity test were performed to screen manufacturing for the strain. Finally, through the execution, we determined to salmonella strain of experimental strain expressing interferon γ and immuno-competence test used salmonella strain for expressing protein.
    In this Immuno-competence test, it has been shown that antibody generation by salmonella strain expressing gene to oral administration. At the same time, in bio-distribution test, we have shown that salmonella distribution in the body up to 3 days to subcutaneous injection and oral administration and 5 days or more recombinant-microbial of the body, not the distribution of microorganisms that could be checked. However, using intravenous injection, at less amount 3days or more, mouse was difficult to survive and without improvement of salmonella strain, we have problem to using this strain with intravenous injection and can be confirm considering problem that product development using the microbial-strain.
    Cancer cell line through the above results, is available in the state of evaluation and efficacy for a range of possible skin cancer, uterine cancer, breast cancer and perform rating on the efficacy and determine the most effective cell line was in the killing. At the same time, we evaluated the antitumor effect in the same animal model. In particular, Uterine cancer mouse model, not only the intravenous injection but oral administration, is reduced effect than subcutaneous injection in the same amount, but the antitumor effect can be induced. Through the results, we can confirmed that efficacy of salmonella strain expressing gene is compared in each path. Following to the Immune-environment, according to the terms of the plasmid, in the presence of other chemotherapy compared the efficacy of the recombinant gene expressing Salmonella evaluate the efficacy of expression.


    본 연구 사업은 유전자치료제의 응용방법으로 최근 연구되고 있는 살모넬라 미생물을 또 다른 벡터로 유전자를 전달, 발현하는 살모넬라를 이용한 유전자 치료제의 효능에 대한 이해와 지침 마련을 목적으로 연구하고자 한다. 이를 위해 살모넬...

    본 연구 사업은 유전자치료제의 응용방법으로 최근 연구되고 있는 살모넬라 미생물을 또 다른 벡터로 유전자를 전달, 발현하는 살모넬라를 이용한 유전자 치료제의 효능에 대한 이해와 지침 마련을 목적으로 연구하고자 한다. 이를 위해 살모넬라를 이용한 유전자 치료제의 효능평가에 대한 이해와 지침 마련을 목적으로 살모넬라형 유전자 전달제제의 제작 및 특성분석, 투여 용량 및 경로별 생체분포 시험을 통한 박테리아 유전자 전달 벡터 측정평가방법 수립에 대한 정보를 제공하고자 다음의 실험을 수행하고자 하였다.
    본 연구사업안에 제시한대로 먼저 살모넬라형 유전자 전달, 발현 제제로 사용할 수 있는 균주를 제작하였다. 이들 균주는 두 가지 종류로 구분되는데 하나는 원핵세포에서 유전자를 발현하여 체내에 단백질발현을 유도하는 미생물균주이고 또 하나는 진핵세포에서 유전자를 발현하는 플라스미드를 포함하는 미생물 균주로 이 균주들은 체내에서 살모넬라의 파괴 시 분비되는 플라스미드에 의해서 단백질발현이 유도된다.
    본 사업에서는 제조된 균주들의 선별을 위해 단백질 발현 시험과 invasion assay 그리고 암세포상해시험을 수행하였다. 각각의 수행을 통해서 최종적으로 인터페론 감마를 발현하는 살모넬라 균주를 실험균주로 결정하였고 면역능 시험은 ova 단백질을 발현하는 살모넬라 균주를 사용하였다.
    면역능 시험에서는 경구로 투여된 유전자 발현 살모넬라 균주에 의해 항체 생성이 확인되는 것을 확인하였다. 동시에 생체분포시험에서 경구투여와 피하주사에서 3일정도 까지 살모넬라가 체내 분포하여 5일 이상 재조합미생물을 분포하지 않는 것을 확인 할 수 있었다. 단, 정맥주사 시에 저용량에서도 3일 이상 마우스가 생존하는데 어려움이 있었고 이는 살모넬라균주의 개량이 없이는 정맥주사로 본 균주가 사용되기 어렵고 미생물 균주를 이용한 치료제 개발에도 고려할 문제임을 확인할 수 있었다.
    위 결과를 통해 암 세포주에서 효능평가가 가능한지와 가능범위에 대해 피부암, 자궁암, 유방암 등에서 효능시험을 수행하였고 대부분의 세포주에서 살해효과를 확인하였다. 동시에 동물모델에서의 항암효과도 평가하였다. 특히 자궁암 마우스 모델에서는 피하주사 뿐 아니라 경구형도 동일 양 투여에서 피하주사보다는 효과가 떨어지지만 항암효과가 유도되는 것을 확인할 수 있었고 이를 통해 유전자발현 살모넬라 균주의 효능이 각각의 경로별로 비교해 볼 수 있음을 확인할 수 있었다.
    면역 환경에 따른, 플라스미드의 조건에 따른 다른 항암요법제의 유무에 따른 비교효능평가에서도 본 재 조합유전자 발현 살모넬라는 효능을 발현하였다.


  • 목차(Contents) 

    1. 용역연구개발과제 최종보고서 ...1
    2. 표지 ...2
    3. 제출문 ...4
    4. 목차 ...5
    5. I. 연구개발결과 요약문 ...6
    6. 최종보고서 요약문 ...6
    7. Summary ...8
    8. II. 총괄연구개발과제 연구결과 ...10
    9. 제1장 총괄연구개발과제의 최종 ...
    1. 용역연구개발과제 최종보고서 ...1
    2. 표지 ...2
    3. 제출문 ...4
    4. 목차 ...5
    5. I. 연구개발결과 요약문 ...6
    6. 최종보고서 요약문 ...6
    7. Summary ...8
    8. II. 총괄연구개발과제 연구결과 ...10
    9. 제1장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ...10
    10. 1.1 총괄연구개발과제의 목표 ...10
    11. 1.2 총괄연구개발과제의 목표달성도 ...35
    12. 1.3 국내.외 기술개발 현황 ...40
    13. 제2장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 방법 ...52
    14. 1차년도 과제 ...52
    15. 2차년도 (당해연도) ...60
    16. 제3장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 결과 ...69
    17. (1) 연구수행내용 ...71
    18. (2) 2차년도(당해년도) 연구개발결과 ...79
    19. 제4장 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ...109
    20. 4.1 유전자 전달 살모넬라의 제조 ...109
    21. 4.2 유전자 전달 살모넬라를 통한 목적유전자 및 단백질 발현평가 ...109
    22. 4.3 유전자 전달 살모넬라의 안정성 시험평가 ...110
    23. 4.4 유전자 전달 살모넬라의 생체분포시험평가 ...111
    24. 4.5 세포주에 대한 in vitro 효력시험평가 ...112
    25. 4.6 암질환 동물모델에 대한 효력 시험평가 ...113
    26. 4.7 질환모델에 있어서 DNA 플라스미드(유전자백신) 및 살모넬라 면역상태에서의 유전자 전달살모넬라의 효력시험 ...113
    27. 4.8 기대성과 ...115
    28. 제5장 총괄연구개발과제의 연구성과 ...118
    29. 5.1 활용성과 ...118
    30. 5.2 활용계획 ...122
    31. 제6장 기타 주요변경사항 ...123
    32. 제7장 참고문헌 ...123
    33. 제8장 첨부서류 ...123
  • 참고문헌

    1. 전체(0)
    2. 논문(0)
    3. 특허(0)
    4. 보고서(0)

 활용도 분석

  • 상세보기

    amChart 영역
  • 원문보기

    amChart 영역