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바이러스 벡터로 형질도입된 항원제시세포의 면역치료제 유효성 평가 및 시험법 연구
Development and estimation of immunotherapeutic cell-based vaccine approaches using antigen presenting cells transduced with viral vector

  • 사업명

    생물생명공학의약품안전관리

  • 과제명

    바이러스 벡터로 형질 도입된 항원 제시세포의 면역치료제 유효성 평가 및 시험법 연구

  • 주관연구기관

    서울대학교
    Seoul National University

  • 연구책임자

    강창율

  • 참여연구자

    고현정   김연정   김병석   김윤선  

  • 보고서유형

    최종보고서

  • 발행국가

    대한민국

  • 언어

    한국어

  • 발행년월

    2007-10

  • 과제시작년도

    2007

  • 주관부처

    식품의약품안전청

  • 사업 관리 기관

    식품의약품안전청
    Korea Food & Drug Administration

  • 등록번호

    TRKO201000014955

  • 과제고유번호

    1475003385

  • 키워드

    바이러스벡터.면역치료제.유효성평가.수지상세포.B 세포.Viral vector.Immunotherapeutics.Efficacy test.dendritic cells.B cells.

  • DB 구축일자

    2013-04-18

  • 초록 


    We developed experimental methods and standards for the measurement and the evaluation of anti-tumor effects elicited by cellular...

    We developed experimental methods and standards for the measurement and the evaluation of anti-tumor effects elicited by cellular vaccines (dendritic cells or B cells) which were transduced with adenoviral vector expressing tumor antigen, as well as loaded with aGalCer on their surface CD1d molecules.
    We made cellular vaccines using antigen presenting cells including DC and B cells. APCs were transduced with adenovirus expressing HPV16 E6/E7 (AdE6E7), and were loaded $\alpha$-galactosylceramide ($\alpha$GalCer), a NKT ligand. We tested whether the cellular vaccines induce antigen-specific immune responses and anti tumor effects in a mouse model and human PBMC system.
    In the mouse model, $\alpha$GalCer loaded on APCs activated NKT cells and NK cells, and activated NKT cells increased expression of activation markers on B cells and DCs. Cellular vaccines transduced with AdE6E7 induced both antigen-specific humoral response and cellular responses.
    Vaccination with cellular vaccines increased IFN-$\gamma$ producing E7-specific CD8+ T cells, and elicited cytotoxic effect against E6/E7 expressing TC-1 tumor cells in immunized mice. After all, cellular vaccine induced anti-tumor effects against TC-1 tumor cells.
    We also evaluated the immunogenicity of cellular vaccine in human PBMC system. We co-cultured cellular vaccines with PBMC cells in vitro. NKT cell activation were confirmed using CD1d dimmer staining. Antigen-specific CD8+ T cell responses were also induced in vitro.
    We assessed IFN-$\gamma$ secreting CD8+ T cells using ELISPOT assay and tested cytotoxic effect against E6/E7 expressing-CasKi human tumor cells In summary, we established the standards and experimental methods to test efficacy of cellular vaccines transduced with viral vector.


    바이러스 벡터를 매개로 형질 도입된 수지상세포 및 B 세포를 이용한 유전자치료제의 효과를 검증하는 기준을 확립하고, 그 작용 기전을 규명하는 실험을 수행함. 바이러스 벡터로형질 도입된 수지상 세포 및 B 세포 백신의 면역원성을 암항...

    바이러스 벡터를 매개로 형질 도입된 수지상세포 및 B 세포를 이용한 유전자치료제의 효과를 검증하는 기준을 확립하고, 그 작용 기전을 규명하는 실험을 수행함. 바이러스 벡터로형질 도입된 수지상 세포 및 B 세포 백신의 면역원성을 암항원인 HPV16 E6/E7을 이용하여 마우스 in vivo 실험과 인간 PBMC 시스템에서 확인하고, 이를 통해 얻어진 결과 및 방
    법론을 유전자 치료제의 유효성 평가 기술로 활용하고자 함.
    aGalCer가 적재된 수지상세포 및 B 세포을 투여함으로써 NKT 세포와 NK 세포의 활성화를 확인할 수 있었고, aGalCer가 적재된 항원제시세포(B 세포, 수지상세포) 역시 효과적으로 활성화되는 것을 관찰하였음. HPV16 E6/E7을 발현하는 바이러스로 형질도입 된 항원제시세포를 이용한 유전자치료제의 유효성을 평가한 결과, 면역화된 마우스에서 항원 특이적인 세포독성반응이 유도되며, E7 CTL epitope에 특이적으로 IFN-$\gamma$를 분비하는 CD8 T cell이 증가함을 확인하였음. 또한 HPV 16 E7 단백질을 사용한 ELISA를 통하여 항원 특이적인 항체반응이 유도되었음을 확인하였으며 궁극적으로 활성화된 면역 반응은 E6/E7을 발현하는 TC-1 암세포에 대하여 항암효과를 나타내었음.
    인간 PBMC 시스템에서 바이러스 벡터로 형질 도입된 항원제시세포를 이용한 유전자치료제 제작 기술을 확립하고 in vitro에서 치료제의 효과를 검증하는 방법을 확립하였음. In vitro에서 aGalCer가 적재된 항원제시세포가 NKT세포를 활성화 시키는 것을 확인하였으며 HPV16 E6/E7을 발현하는 바이러스로 형질도입된 항원제시세포를 이용한 유전자치료제가
    in vitro에서 E6,E7에 특이적인 CD8 T세포 반응을 일으켰으며, 암항원을 발현하는 암세포에 대하여 세포독성을 나타내었음.
    이러한 연구를 통하여 바이러스로 형질 도입된 수지상세포 및 B 세포를 이용한 유전자 치료제의 효과를 마우스모델과 인간 시스템에서 검증하는 기준 및 시험법을 마련하였음.


  • 목차(Contents) 

    1. 용역연구사업 연구결과보고서...1
    2. 표지...2
    3. 제 출 문...4
    4. 목 차...5
    5. Ⅰ. 연구개발결과 요약문...6
    6. (한글)...6
    7. (영문)...8
    8. Ⅱ. 총괄연구개발과제 연구결과...10
    9. 제1장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표...10...
    1. 용역연구사업 연구결과보고서...1
    2. 표지...2
    3. 제 출 문...4
    4. 목 차...5
    5. Ⅰ. 연구개발결과 요약문...6
    6. (한글)...6
    7. (영문)...8
    8. Ⅱ. 총괄연구개발과제 연구결과...10
    9. 제1장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표...10
    10. 1.1 총괄연구개발과제의 목표...10
    11. 1.2 총괄연구개발 과제의 목표달성도...14
    12. 1.3 국내.외 기술개발 현황...16
    13. 제2장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 방법...18
    14. 2.1 연구개발 내용...18
    15. 2.2 연구개발 방법...22
    16. 제3장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 결과...27
    17. 3.1 1차년도 연구 결과...27
    18. 3.2 2차년도 연구 결과...34
    19. 제4장 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...42
    20. 4-1 연구 결과 고찰...42
    21. 4-2 결론...44
    22. 제5장 총괄연구개발과제의 연구성과...45
    23. 제6장 기타 중요변경사항...47
    24. 제7장 참고문헌...48
    25. 제8장 첨부서류...50
  • 참고문헌

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