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보고서 상세정보

유전자재조합식품의 신속 검사법 개발
Development of rapid GMO detection method

  • 사업명

    식품안전연구개발

  • 과제명

    유전자재조합식품 신속검사법 개발

  • 주관연구기관

    경희대학교
    Kyung Hee University

  • 연구책임자

    김해영

  • 보고서유형

    최종보고서

  • 발행국가

    대한민국

  • 언어

    한국어

  • 발행년월

    2006-11

  • 과제시작년도

    2006

  • 주관부처

    식품의약품안전청

  • 사업 관리 기관

    식품의약품안전청
    Korea Food & Drug Administration

  • 등록번호

    TRKO201000015096

  • 과제고유번호

    1470000069

  • 키워드

    유전자재조합 작물.경합효소중합반응.다중효소중합반응.마이크로어레이.GMO.Competitive PCR.Multiplex PCR.Microarray.

  • DB 구축일자

    2013-04-18

  • 초록 


    In the first year, the gene information and standard materials for eight different events of genetically modified (GM) maize (Mon...

    In the first year, the gene information and standard materials for eight different events of genetically modified (GM) maize (Mon810, T25, TC1507, GA21, NK603, Mon863, Event176 and Bt11) safety-approved in Korea were acquired. To detect these different events of GM maize, the endogenous gene (zein) and specific primers of GM maizes were developed and PCR condition was established. Especially, 9 pairs of specific primers were able to apply to processed foods. Eight different events of GM maize according to the PCR condition in the revision of Food Standard in KFDA notice 2005-3 were divided into two tubes with four different GM maizes. Using these eight different events of GM maize, the imultaneous multiplex PCR method were developed. Also, the competitive PCR method for semi-quantitative analysis was developed to detect the 3% threshold of GM maize Mon 810. To apply microarray analysis for GM maize efficiently, the following methods were performed in first year study. 1) selection of specific probes from each GM crops 2) decision of the types of slide glass and fluorescent dye 3) set-up of labeling method. In the second year, the multiplex PCR method of three different GM canola (GT73, MS8xRF3 and T45) were developed by the gene information and standard materials. Specific primer sets of four different GM cotton (Event 1445, Event 15985, Event 531, LLcotton 25) were also constructed and found its specificity in individual sample. Nevertheless, multiplex PCR of GM cotton has not done due to cross-contamination of standard materials. this work will performed In addition, based on the first year results, the microarray analysis was performed to distinguish eight different events of GM maize. Probes were prepared from promoter, terminator and the inserted genes of eight GM maizes and constructed on the amino modified slide glass.


    연구 1차년에서는 국내에서 안전성 심사가 완료된 유전자재조합 옥수수 8종(Mon810, T25, TC1507, GA21, NK603, Mon863, Event176, Bt11)에 대한 유전정보 및 표준시료 확보하였고, 이들 유전자재...

    연구 1차년에서는 국내에서 안전성 심사가 완료된 유전자재조합 옥수수 8종(Mon810, T25, TC1507, GA21, NK603, Mon863, Event176, Bt11)에 대한 유전정보 및 표준시료 확보하였고, 이들 유전자재조합 옥수수 8종을 효율적으로 검사하기 위해 옥수수의 내재유전자 Zein과 각각의 유전자재조합 옥수수들에 특이적인 primer set를 개발하였다. 특히,
    가공식품의 분석에 적용할 수 있도록 PCR 산물의 크기를 200 bp 미만이 되도록 모두 9쌍의 primer를 개발하였고, 식품의약품안전청 고시 제2005-3호 식품의기준및규격중개정에서 제시하고 있는 PCR 조건에 맞추어 8종의 유전자재조합 옥수수들을 4종씩 나누어 하나의 튜브에서 각각에 특이적인 primer set를 이용하여 동시에 스크리닝 할 수 있는 Multiplex PCR법을 개발하였다. 또한, 유전자재조합 옥수수 Mon810의 반정량적 분석을 위한 Competitive PCR법을 국내 표시제에서 규정하고 있는 3% threshold 기준에 맞추어 개발하였다. 그리고, 유전자재조합 옥수수들을 분석하는데 있어서 microarray를 적용하기 위해 각각의 유전자재조합 작물들에 특이적인 probe를 선별하고, 최적의 조건을 마련하기 위해 슬라이드 글라스의 종류 및 fluorescent dye를 선정하고, 다양한 labeling을 방법을 시도함으로써 2차년도 연구목표인 microarray 분석법 개발을 위한 여러 가지 조건들을 검토하였다.연구 2차년에서는 유전자재조합 카놀라 3종(GT73, MS8xRF3, T45)에 대한 유전정보와 표준물질을 확보하여 이들에 대한 multiplex PCR 분석법을 확립하였다. 유전자재조합 면화의 경우 4종(Event1445, Event15985, Event531, LLcotton25)에 대한 유전정보를 기초로 특이적인 primer set을 제작하여 개별적인 특이성은 확인하였으나, 이들에 대한 표준시료의 교차오염으로 인해 multiplex PCR를 수행하지 않았다. 이후 정확한 표준시료를 확보한 후 multiplex PCR를 수행할 것이다. 그리고 1차년도에 micrarray 분석법 개발을 위한 여러 가지 조건들을 기초로 옥수수 8종에 삽입된 promoter, terminator, inserted gene 각각에 대한 probes를 제작하여 amino modified slide glass에 심어놓고 이들에 대한 target DNA를 PCR를 이용하여 준비한 후 ybridization을 실시하였다. 8종의 유전자 재조합 옥수수 각각에 삽입된 promoter, terminator, inserted gene을 동시에ybridization시켜 얻은 spot signal을 통해 각각의 유전자재조합 옥수수를 판별할 수 있는 방법을 제시하였다.


  • 목차(Contents) 

    1. 용역연구사업 연구결과보고서...1
    2. 제출문...2
    3. 목차...3
    4. Ⅰ. 연구개발결과 요약문...4
    5. (한글) 요약문...4
    6. (영문)Summary...5
    7. Ⅱ. 총괄연구개발과제 연구결과...6
    8. 제1장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ...6
    9. ...
    1. 용역연구사업 연구결과보고서...1
    2. 제출문...2
    3. 목차...3
    4. Ⅰ. 연구개발결과 요약문...4
    5. (한글) 요약문...4
    6. (영문)Summary...5
    7. Ⅱ. 총괄연구개발과제 연구결과...6
    8. 제1장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ...6
    9. 1.1 총괄연구개발과제의 목표...6
    10. 1.2 총괄연구개발과제의 목표달성도...6
    11. 1.3 국내.외 기술개발 현황...6
    12. 제2장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 방법 ...7
    13. 2.1 연구내용...7
    14. 2.2 연구방법...7
    15. 제3장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 결과 ...20
    16. 3-1 안전성 심사가 완료된 유전자재조합 농산물의 유전정보 조사...20
    17. 3-2 유전자재조합 옥수수(Mon810)에 대한 Competitive PCR 개발...22
    18. 3-3 유전자재조합옥수수 가공식품 분석을 위한 multiplex PCR 분석법 개발...27
    19. 3-4 DNA chip을 이용하는 microarray method 개발을 위한 probe의 분석조건 검토...34
    20. 3.5 국내 안전성 심사가 완료된 카놀라에 대한 정성분석을 위한 각각 의 특이적인 primer set 개발...37
    21. 3.6 유전자재조합 카놀라에 대한 multiplex PCR...37
    22. 3.7 국내 안전성 심사가 완료된 면화에 대한 multiplex PCR 정성분석을 위한 각각의 특이적인 primer set 개발...40
    23. 3.8 DNA microarray에 적용될 probe 개발...42
    24. 제4장 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ...55
    25. 제5장 총괄연구개발과제의 연구성과 ...56
    26. 5.1 활용성과...56
    27. 5.2 활용계획...58
    28. 제6장 기타 중요변경사항 ...59
    29. 제7장 참고문헌 ...60
    30. 제8장 첨부서류 ...63
  • 참고문헌

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