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보고서 상세정보

황련의 90일 반복투여독성 및 유전독성시험
90 days Repeated Dose Toxicity and genotoxicity test of Coptis chinensis

  • 과제명

    천연물 등의 13주 반복투여 및 유전독성시험(ll)-석창포,황련,단삼,오수유

  • 주관연구기관

    바이오톡스텍(주)

  • 연구책임자

    이혜영

  • 보고서유형

    최종보고서

  • 발행국가

    대한민국

  • 언어

    한국어

  • 발행년월

    2009-11

  • 과제시작년도

    2009

  • 주관부처

    식품의약품안전청

  • 사업 관리 기관

    식품의약품안전청
    Korea Food & Drug Administration

  • 등록번호

    TRKO201000015195

  • 과제고유번호

    1475005105

  • 키워드

    황련.조제물분석.반복독성.유전독성.Coptis chinensis.Validation.repeated dose toxicity.genotoxicity.

  • DB 구축일자

    2013-04-18

  • 초록 


    [1] Validation of analytical method and determination of the stability of Coptis chinensis‘s formulation
    This study was perfor...

    [1] Validation of analytical method and determination of the stability of Coptis chinensis‘s formulation
    This study was performed to validate the analytical method of formulations for Coptis chinensis by high performance liquid chromatograph. The results of systemsuitability, linearity, specification, and intra-day were satisfied with a criterion. And, formulations were homogeneous each phase as upper, middle, and bottom. Formulations that were formulated by high concentration (400 mg/mL) and low concentration (1 mg/mL) were stable for 4 hours at room temperature and for 7 days under refrigeration. In autosampler, the treated samples for analysis were stable for 14 hours in low and high concentrations, respectively.
    [2] 2-week oral dose range finding study of Coptis chinensis
    This study was performed to determine the dose levels for performing 90 days repeated dose toxicity study in male and female F344 (F344NSlc) rats. The test substance, Coptis chinensis, was administered orally 12 times to 6-week male and female F344 rats at the doses of 125, 250, 500, 1000, and 2000 mg/kg for 2 weeks. The control group was administered the vehicle (Water for injection) alone. Each group had 5 animals per sex.
    Monitoring clinical signs and measuring body weight were conducted throughout the study. At the end of dosing, all animals were necropsied with major organs being weighed, and histopathological findings were examined.
    There were no deaths in all animals.
    No abnormal clinical signs were observed in the male and female treatment groups.
    No significant difference was observed on the body weights and organ weights in the male and female treatment groups. At necropsy, no treatment-related macroscopic findings were noted in all animals.
    There were no treatment-related histopathological findings in the male and female 2000 mg/kg groups.
    As a result of the 14-day dose range finding study of Coptis chinensis, there were no toxicological signs in the males and females treated with 2000 mg/kg test substance.
    Therefore, the high dose level for 13 weeks repeated dose toxicity study is considered to be 2000 mg/kg.
    [3] 13-week repeated ora l dose toxicity study of Coptis chinensis
    This study was conducted to assess the toxic reaction of the test substance, Coptis chinensis, when administered five times per week to 6-week-old F344 (F344NSlc) rats by oral gavage for a period of 13 weeks. Test groups consisted of five dosed groups at dose levels of 25, 74, 222, 667 and 2000 mg/kg plus the control. Observations of clinical signs, measurements of body weight and food consumption, urinalysis, and vaginal cytology were conducted throughout the study. At the end of dosing, blood samples were collected for hematological and blood chemistry examinations. All animals were necropsied with major organs being weighed; sperm morphology and histopathological findings were examined.
    Body weights of 2000 mg/kg dose males were statistically significantly decreased, and food consumption of 2000 mg/kg dose males and females was statistically significantly decreased at Week 1.
    Increases of NAG in urine were evident in males of 2000 mg/kg group. Increases of creatinine were evident in males and females of 2000 mg/kg group. There were no histopathological changes of kidneys.
    Dilatation of cecum was noted in males and females of 667 and 2000 mg/kg groups macroscopically, but it was not associated with histopathological changes since it was probably caused by the osmotic value of the cecal contents. Therefore, it was considered to be toxicological significance.
    Appearances of gloden-brown pigmented macrophages in mesenteric lymph node were evident in males of 222 mg/kg group and in males and females of 667 and 2000 mg/kg groups. These were not considered to be toxicological significance due to adaptive responses to remove the brown-colored test substance.
    No statistically significant differences in the examinations of clinical signs, hematology, blood chemistry, vaginal cytology, sperm morphology, and organ weights were noted in males and females dosed with the test substance.
    Based on the results of this study, decreases of body weights and food consumption and changes in urine were observed in males and females dosed with 2000 mg/kg.
    In conclusion, the no observed adverse effect level (NOAEL) of Coptischinensis was 667 mg/kg for 13-week oral toxicity study in rats.
    [4] Bacterial reverse mutation test of Coptis chinensis
    This study was designed to examine the mutagenic potential of Coptis chinensis using Salmonellatyphimurium(TA98,TA100,TA1535,andTA1537)andEscherichiacoli(WP2uvrA(pKM 101))strains. As a result of dose range-finding test, the growth inhibition was observed at 5000 μg/plate dose level in the absence and presence of metabolic activation systems.
    But depositions were not observed at all dose levels in the absence and presence of metabolic activation systems.
    According to the result of dose range-finding test, the highest dose in main test was determined as 5000 μg/plate and was sequentially diluted by a geometric ratio of 2 to produce additional 5 lower dose levels. And the negative and positive control groups were set.
    As a result of main test, the number of revertant colonies in TA100, TA1535, and TA1537 was not increased more than twice as compared with the negative control group in the absence and presence of metabolic activation. But TA98 was increased more than twice as compared with the negative control group in the absence of metabolic activation at 313 μg/plat dose level. WP2uvrA(pKM101) strain was increased more than twice as compared with the negative control group in the absence of metabolic activation at 625?2500 μg/plat dose levels, and the growth inhibition was observed at 5000 μg/plate dose level. The number of revertant colonies was increased more than twice as compared with the negative control group in the presence of metabolic activation at 625 and 1250 μg/plat dose levels, and the growth inhibition was observed at 5000 μg/plate dose level. But precipitation was not observed at all dose levels in the absence and presence of metabolic activation systems.
    In the positive control, the number of revertant colonies was distinctly increased as compared with the negative control group.
    In conclusion, the test substance, Coptis chinensis was shown determined the mutagenic potential conditions of this study.
    [5] In vitro chromosome aberration test of Coptis chinensis using mammalian cultured cell
    This study was conducted to examine the potential of the test substance, Coptis chinensis, to induce chromosome aberrations in Chinese hamster lung cell (CHL/IU).
    The growth inhibition test revealed the cytotoxicity in the short time treatment with and without S9 mix, and in the continuous treatment. Based on the results of the growth inhibition test, 50 % inhibition concentration ($IC_{50}$)was calculated as 842.9 and 2231.9μg/mL for the short time treatment without and with S9 mix, respectively, and as 1274.2 μg/mL for the continuous treatment.
    Therefore, the highest dose for in vitro chromosome aberration test was determined as 850 and 2300μg/mL for the short time treatment without and with S9 mix, respectively, and as 1280 μg/mL for the continuous treatment. Those were sequentially diluted by a geometric ratio of 2 to produce 2 additional lower doses accompanied by negative and positive controls. treatment. Those were sequentially diluted by the geometric ratio of 2 to produce 3 additional lower doses accompanied by the negative and positive control groups.
    As a result, the frequency of the structural chromosome aberration and the number of structural chromosome aberration cells chromosome aberration cells was less than 5% in the short time treatment both without and with metabolic activations and in the continuous treatment of all doses of the test substance.
    In the positive control group, the structural chromosome aberration was significantly increased (Fisher’s exact test, p<0.05).
    The test substance, Coptis chinensis, did not show the chromosome aberrations in the short time treatment without and with metabolic activation and the continuous treatment using Chinese hamster lung cell (CHL/IU) under the conditions of this study.
    [6] In vivo micronucleus test of Coptis chinensis in mice
    This study was performed to determine the mutagenic potential of the test substance, Coptis chinensis, in the micronucleus test using bone marrow cells when administered once by the oral gavage to male ICR mice.
    For the determining of the highest dose and bone marrow collection time, the dose range finding test and bone marrow collection time determining test were performed. As a result, the highest dose for invivo micro nucleus test was determined as 2000 mg/kg and the bone marrows were collected at 24 hours after the administration.
    In vivo micronucleus test was conducted at 3 dose levels of 500, 1000 and 2000 mg/kg of the test substance. In addition, the negative and positive control groups were included in the test. Five mice per group were used.
    As a result of main test, the animal death and clinical signs were not observed at all doses of test substance.
    There was not body weight change during the test period.
    There were no statistically significant increase and dose-dependency (p<0.05) in appearance ratio of micronucleated polychromatic erythrocytes (MNPCE) in polychromatic erythrocytes (PCE) for all test substance groups as compared with that of the negative control group. The proportions of PCE in total erythrocyte were also no significant difference between test substance group and negative control group.
    In the positive control, the appearance ratio of MNPCE in PCE was significantly increased as compared with that of the negative control group.
    Based on these results, it was concluded that the test substance, Coptis chinensis, did not influence on the micronucleus formation in the bone marrow cells of mice under the condition of this study.
    [7] In vitro mammalian cell gene mutation test of Coptis chinensis using mammalian cultured cell
    This study was designed to examine a mutagenic potential of Coptis chinensis in mammalian cell gene mutation test system using the L5178Y/$TK^{+/-}$ mouselymphomacells.
    The cytotoxicity was observed in the short time treatment with and without metabolic activation and in continuohoutreatment without metabolic activation. Therefore, calculated th% relative survival ($RS_{th}$) in the short time treatment with and without metabolic activation was 173 and 7t.3 μmemL, respectively, and that in the continuohoutreatment without metabolic activation was 24.3 μg/mL.
    As a result of a dose range finding study, the highest dose for a main study in the short time treatment with and without metabolic activation was selected as 170 and 70 μg/mL, respectively, and in the continuous treatment without metabolic activation was selected as 20 μg/mL. Those were sequentially diluted to produce 7 additional lower doses plus the negative and positive control groups.
    As a result, the mutant frequency (MF) at 11 μg/mL in the short time treatment with metabolic activation was significantly increased when compared to the negative control group (p<0.05). In the MF value, 114 at 11 μg/mL in the short time treatment with metabolic activation was within the historical control data and was not showed dose-dependent increase, then was no biologically significant difference. In the short time treatment without metabolic activation and continuous treatment without metabolic activation, the MF was not significantly increased when compared to the negative control group.
    In the positive control group, the MF was significantly increased when compared to the negative control group.
    In conclusion, test substance, Coptis chinensis, did not showed the mutagenic potential in mammalian cell gene mutation test system using L5178Y/$TK^{+/-}$ mouse lymphoma cells under the conditions of this study


    [1] 황련의 조제물의 농도 분석법 Validation 및 안정성 확인시험
    본 연구에서는 황련의 조제물 분석법 검증을 HPLC를 이용하여 수행하였다. 시스템 적합성, 직선성, 특이성, 일내재현성 측정결과 판정기준을 모두 만족하...

    [1] 황련의 조제물의 농도 분석법 Validation 및 안정성 확인시험
    본 연구에서는 황련의 조제물 분석법 검증을 HPLC를 이용하여 수행하였다. 시스템 적합성, 직선성, 특이성, 일내재현성 측정결과 판정기준을 모두 만족하였으며, 조제물은 상, 중, 하층에서 모두 균질하였다. 고농도 400 mg/mL 와 저농도 1 mg/mL 농도의 조제물은 실온에서 4시간, 냉장에서 7일간 안정한 것으로 확인되었으며, 측정을 위해 처리된 시료는 autosampler에서 14 시간 동안 안정하였다.
    [2] 황련의 랫드를 이용한 2주 반복 경구투여 용량결정시험
    황련의 90일 반복투여 독성시험시 용량설정 근거로 사용하고자, 6주령 (투여개시시 주령) 암.수 F344 (F344NSlc) 랫드에 125, 250, 500, 1000, 2000 mg/kg의 5개의 용량으로 14일간 총 12회 강제 경구 투여하였다. 대조군에는 주사용수를 투여하였다. 일반증상 관찰, 체중측정, 부검시 장기중량 측정과 육안적 검사를 실시하였고, 주요장기에 대해 조직병리학적 검사를 수행하였다.
    암.수 시험물질투여군에서 일반증상, 체중, 장기중량 및 부검에서 시험물질에 의한 영향은 관찰되지 않았다.
    조직병리학적 검사 결과, 암.수 2000 mg/kg 투여군에서 시험물질에 의한 소견은 관찰되지 않았다.
    이상으로 황련을 2주 경구 반복 투여한 결과, 암.수 2000 mg/kg 투여군에서 시험물질 투여에 기인한 독성변화가 관찰되지 않았다. 따라서 13주 반복투여 독성시험의 고용량은 2000 mg/kg으로 설정해야 할 것으로 판단된다.
    [3] 황련의 랫드를 이용한 13주 반복 경구투여 독성시험
    황련에 대한 반복 경구투여시 발현될 수 있는 독성에 대한 안전성을 평가하고자, 암수 랫드를 이용하여 13주 반복 경구투여 독성시험을 실시하였다.
    투여기간동안 수컷 2000 mg/kg 투여군에서 투여 9 ~ 12주에 체중이 유의성 있게 감소하여 시험물질 투여에 기인한 영향이 인정된다. 또한 암수 2000 mg/kg 투여군에서 투여 1주에 사료섭취량의 유의성 있는 감소가 관찰되어 시험물질 투여에 기인한 영향이 인정된다.
    혈액학적 검사, 암컷 성주기 검사, 수컷의 정자검사 및 장기중량에서 시험물질 투여에 기인한 독성변화는 인정되지 않았다.
    뇨검사 결과, 2000 mg/kg 투여군에서 수컷은 뇨내 NAG (N-Acetyl-β-Glucosaminidase), 크레아티닌, 암컷은 크레아티닌의 뇨내 배설 증가가 관찰되어 시험물질 투여에 기인한 영향이 인정되나, 신장의 조직병리학적 검사결과 형태학적인 변화는 동반되지 않았으므로 신장의 기능적인 이상만 인정되었다.
    혈액생화학적 검사 결과, 수컷 시험물질 투여군에서 총단백의 감소, 알부민의 감소, A/G ratio의 증가, 알라닌 아미노기전이효소와 혈당의 감소가, 암컷 시험물질투여군에서 크레아틴 키나아제, 알라닌 아미노기전이효소, 아스파테이트 아미노기전이효소, 소르비톨탈수소효소와 총콜레스테롤의 증가, 알칼라인 포스파타제와 혈액요소질소의 감소가 확인되었다. 그러나, 관찰된 항목 모두 시험물질에 의한 직접적인 간세포 파괴나 담관의 손상 또는 신장의 변화가 동반하지 않았으며, 성별에 따라 변화가 관찰된 항목이 서로 달라 일관성이 없었으며, 모두 비교적 경미한 변동이었으므로, 독성학적으로 주목할 만한 것은 없었다.
    부검에서 암수 667 및 2000 mg/kg 투여군에서 맹장의 종대가 관찰되었으나, 조직병리학적 검사 결과 이상소견은 관찰되지 않았다. 이러한 맹장 종대는 형태학적 변화가 동반되지 않았으면서, 단순히 맹장내용물의 삼투압에 의해서 조절되는 생리적 적응과정9)으로서 독성학적 의미는 없었다.
    조직병리학적 검사 결과, 수컷 222 mg/kg 투여군, 암수 667 및 2000 mg/kg 투여군에서 장간막림프절에 황갈색의 색소가 침착된 마크로파지의 출현이 관찰되었으나, 이러한 황갈색의 색소가 침착된 마크로파지의 출현은 성상이 갈색 분말인 시험물질을 제거하기 위한 적응반응으로 판단되었다.
    이상으로 황련에 대한 암수 랫드를 이용한 13주 반복 경구투여 독성시험을 실시한 결과, 수컷 2000 mg/kg 투여군에서 체중 및 사료섭취량의 감소가 관찰되었고, 암수 2000 mg/kg 투여군에서 뇨검사 항목의 변화가 인정되었다. 따라서, 본 시험 조건 하에서의 무독성량 (NOAEL)은 암수 모두 667 mg/kg으로 판단된다.
    [4] 황련의 세균을 이용한 복귀돌연변이시험
    시험물질인 황련의 유전자돌연변이 유발성을 히스티딘 요구성인 살모넬라균 (TA98, TA100, TA1535, TA1537) 및 트립토판 요구성인 대장균 (WP2uvrA(pKM101))을 이용하여 대사활성화비존재하 및 존재하인 각각의 경우에 대해 검토하였다.
    용량설정시험 결과 WP2uvrA(pKM101)의 대사활성화비존재하 및 존재하의 5000 μg/plate 용량에서 생육저해가 관찰되었고 그 외 용량 및 나머지 균주의 모든 용량에서는 생육저해 및 시험물질의 침전은 나타나지 않았다.
    본시험의 결과, TA100, TA1535 및 TA1537균주에 있어 시험물질군의 복귀변이콜로니 수는 대사활성화비존재하 및 존재하에서 용량의존적으로 증가되지 않았고 음성 대조군과 비교하여 2배 이상의 증가를 보이지 않았으나, TA98 균주의 대사활성화 비존재하의 313 μg/plate 용량에서 음성대조군과 비교하여 2배이상의 증가를 보였다. WP2uvrA(pKM101)균주의 대사활성화비존재하에서는 625 ~ 2500 μg/plate 용량에서 음성대조군과 비교하여 2배 이상의 증가를 보였으며 5000 μg/plate 용량에서는 생육저해가 관찰되었다. 또한 대사활성화존재하의 625 및 1250 μg/plate 용량에서 음성대조군과 비교하여 2배 이상의 증가를 보였으며 5000 μg/plate 용량에서는 생육저해가 관찰되었다. 대사활성화비존재하 및 존재하에서 모든 균주의 모든 용량에서 시험물질에 의한 침전은 관찰되지 않았다.
    한편, 각 균주에서 양성대조군의 복귀변이콜로니수는 음성대조군과 비교하여 확실한 증가가 인정되었다.
    이상의 결과로부터, 본 시험조건에서 시험물질인 황련의 유전자돌연변이 유발성은 양성으로 판정되었다.
    [5] 황련의 포유류 배양세포를 이용한 염색체이상시험
    시험물질인 황련의 염색체이상 유발성 유무를 검토하기 위하여 Chinese Hamster Lung(CHL/IU) 배양세포를 이용한 염색체이상시험을 실시하였다.
    세포증식억제시험의 결과, 세포독성을 나타내어 $IC_{50}$을 구한 결과, 단시간 처리법으로서 대사활성화비존재하의 경우 842.9 μg/mL, 단시간처리법으로서 대사활성화존재하의 경우 2231.9 μg/mL, 연속처리법으로서 대사활성화비존재하에 있어 24시간 처리의 경우는 1274.2 μg/mL이었다.
    따라서, 단시간처리법으로서 대사활성화비존재하의 경우 850 μg/mL, 대사활성화존재하의 경우 2300 μg/mL, 연속처리법으로서 대사활성화비존재하에 있어 24시간 처리의 경우 1280 μg/mL를 본시험의 최고용량으로 설정하고 이하 공비2로 총 4용량의 시험물질군을 설정하였다. 또한 음성 대조군 및 양성 대조군을 설정 하였다.
    시험결과 단시간처리법의 대사활성화비존재하 및 존재하, 연속처리법의 대사활성화 비존재하 모두에서 각 용량의 구조이상 및 수적이상을 가진 세포의 출현빈도는 5% 미만으로 염색체이상 유발작용은 인정받지 않았다.
    한편, 양성대조군의 구조이상을 가진 세포의 출현빈도는 현저하게 증가하였다.
    이상의 결과로부터 본 시험조건하에서 시험물질인 황련은 단시간처리법의 대사 활성화비존재하 및 존재하, 연속처리법의 대사활성화비존재하 모두에서 Chinese Hamster Lung (CHL/IU) 배양세포에 대해 염색체이상을 유발하지 않는 것으로 판단된다.
    [6] 황련의 마우스를 이용한 소핵시험
    시험물질인 황련의 마우스 골수세포에 대한 소핵유발 유무를 평가하기 위하여 시험을 실시하였다.
    최고용량 및 검체제작시간을 설정하기 위하여, 용량설정시험 및 골수도말표본 제작시간 설정시험을 실시하였다. 이러한 결과에 따라 본시험에서의 최고용량은 2000 mg/kg으로 투여 후 24시간을 골수세포 채취시간으로 결정하였다.
    본시험은 시험물질 500, 1000 및 2000 mg/kg의 총 3용량을 설정하였으며 각 군당 5마리의 마우스를 사용하였다. 또한 음성대조군 및 양성대조군을 두었다.
    본시험의 결과, 모든 시험물질군에서 시험물질 투여에 의한 사망동물은 없었고 독성증상도 관찰되지 않았다.
    체중변화는 실험 전 기간을 통하여 유의성 있는 변화는 관찰되지 않았다.
    시험물질군에서 다염성적혈구 (Polychromatic erythrocyte, PCE)중 소핵다염성적혈구 (Micronucleated polychromatic erythrocyte, MNPCE)의 빈도는 모든 용량에서 음성대조군과 비교하여 통계학적으로 유의한 증가 (p<0.05)가 관찰되지 않았다. 다만 총 적혈구 중 다염성적혈구의 비율은 음성대조군과 비교하여 1000 mg/kg의 용량 에서만 유의한 차이가 관찰되었다.
    한편, 양성대조군의 다염성적혈구 중 소핵다염성적혈구의 출현빈도는 음성대조군과 비교하여 현저한 증가가 인정되었다.
    이상의 결과로부터 황련은 본 시험의 조건하에서 마우스 골수세포의 소핵유발에 영향을 주지 않는것으로 판단된다.
    [7] 황련의 포유류 배양세포를 이용한 유전자돌연변이시험
    시험물질인 황련의 유전자돌연변이 유발성을 확인하기 위하여 L5178Y $TK^{+/-}$ 마우스 림포마 세포를 이용한 유전자돌연변이시험을 실시하였다.
    용량설정시험의 결과, 대사활성화 유무에 관계없이 단시간처리법 및 연속처리법 모두에서 세포독성이 나타났다. 따라서, $RS_{20}$을 구한 결과 단시간처리법으로서 대사활성화비존재하의 경우는 72.3μg/mL, 단시간처리법으로서 대사활성화존재하의 경우는 173 μg/mL 및 연속처리법으로서 대사활성화비존재하의 24시간 처리의 경우는 24.3 μg/mL이었다.
    따라서, 단시간처리법으로서 대사활성화비존재하의 경우 70 μg/mL, 대사활성화존재하의 경우 170 μg/mL, 연속처리법으로서 대사활성화비존재하에 있어 24시간 처리의 경우 20 μg/mL를 본 시험의 최고용량으로 설정하고 이하 공비 2로 총 8용량의 시험물질군을 설정하였다. 또한 음성대조군 및 양성대조군을 설정 하였다.
    본시험 결과, 단시간처리법으로서 대사활성화존재하의 경우에는 11 μg/mL,의 용량에서 Mutant frequency (MF)값이 음성대조군에 비해 유의성 있는 증가 (p<0.05)가 관찰되었다. 하지만, 11 μg/mL용량의 MF값인 114는 음성대조군의 배경데이타의 범위에 속하며, 시험물질군에서 용량의존성을 갖지 않기 때문에 생물학적인 유의성은 없다고 판단되었다.
    그 외, 단시간처리법의 대사활성화비존재하 및 연속처리법으로서 대사활성화비존재하에 있어 24시간 처리의 경우에는 시험물질군의 MF값이 음성대조군에 비해 유의한 증가는 관찰되지 않았다.
    한편, 양성대조군의 MF는 음성대조군과 비교하여 유의성 있게 증가하였다.
    이상의 결과로 시험물질 황련은 본 시험의 조건하에서 L5178Y $TK^{+/-}$마우스 림포마 세포에 유전자돌연변이를 일으키지 않는 것으로 판단된다.


  • 목차(Contents) 

    1. 표지 ...1
    2. 용역연구개발과제 최종보고서 ...2
    3. 제출문 ...3
    4. 목차 ...4
    5. I. 최종보고서 요약문 ...5
    6. 1. 한글 요약문 ...5
    7. 2. 영문 요약문 ...11
    8. II. 총괄연구개발과제 연구결과 ...18
    9. 제1장 총괄연구개발과제의 최...
    1. 표지 ...1
    2. 용역연구개발과제 최종보고서 ...2
    3. 제출문 ...3
    4. 목차 ...4
    5. I. 최종보고서 요약문 ...5
    6. 1. 한글 요약문 ...5
    7. 2. 영문 요약문 ...11
    8. II. 총괄연구개발과제 연구결과 ...18
    9. 제1장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ...18
    10. 1절. 총괄연구개발과제의 목표 ...18
    11. 2절. 총괄연구개발과제의 목표달성도 ...19
    12. 3절. 국내.외 기술개발 현황 ...20
    13. 제2장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 방법 ...21
    14. 1절. 연구내용 ...21
    15. 제3장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 결과 ...70
    16. 1절. 황련의 조제물의 농도 분석법 Validation 및 안정성 확인시험 ...70
    17. 2절. 황련의 2주 반복 경구투여 용량결정시험 ...85
    18. 3절. 황련의 13주 반복 경구투여 독성시험 ...107
    19. 4절. 황련의 세균을 이용한 복귀돌연변이시험 ...214
    20. 5절. 황련의 포유류 배양세포를 이용한 염색체이상시험 ...221
    21. 6절. 황련의 포유류 배양세포를 이용한 유전자돌연변이시험 ...229
    22. 제4장 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ...240
    23. 제5장 총괄연구개발결과의 연구성과 ...243
    24. 제6장 기타중요변경사항 ...244
    25. 제7장 참고문헌 ...244
    26. 제8장 첨부서류 ...245
  • 참고문헌

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