본문 바로가기
HOME> 보고서 > 보고서 검색상세

보고서 상세정보

인태반 유래 의약품의 유전자분석 시험법 개선 및 검증에 관한 연구
Establishment of the verification methods on human placenta related medical products using genetic analyses

  • 사업명

    생물의약품 안전관리

  • 과제명

    인태반 유래 의약품의유전자분석 시험법 개선 및 검증에 관한 연구

  • 주관연구기관

    솔젠트(주)

  • 연구책임자

    명현군

  • 보고서유형

    최종보고서

  • 발행국가

    대한민국

  • 언어

    한국어

  • 발행년월

    2010-02

  • 과제시작년도

    2009

  • 주관부처

    식품의약품안전청

  • 사업 관리 기관

    식품의약품안전청
    Korea Food & Drug Administration

  • 등록번호

    TRKO201000015761

  • 과제고유번호

    1475004833

  • 키워드

    인태반.종특이적 마커.Human placenta.Species specific marker.Real-Time PCR.

  • DB 구축일자

    2013-04-18

  • 초록 


    Human placenta extract has been widely used in the clinical and cosmetic fields, and is known to possess marked antioxidant activ...

    Human placenta extract has been widely used in the clinical and cosmetic fields, and is known to possess marked antioxidant activity. These days, some medical products of human placenta in the clinical market are made from animal placental extracts instead of human placental extracts due to short of human placenta. Increasing chance to use animal placenta alternative human placenta requires establishment of the verification methods on human placenta related in medical products. Our study is focused on optimizing DNA extraction method from medical products and on developing the methods for distinguishing species origin of the products using real time PCR. We established the DNA extraction method with high purity and concentration using modified chloroform extraction method. Total 100 pg of DNA was purified from 4 ml of medical products quantified by standard curve of real time PCR. 100 pg of DNA is enough amount for 10 times real time PCR, and the DNA concentration can be increased by using more than 4 ml of medical products. Mitochondrial DNA, cytochrome C oxidase 1 (COX1) gene was determined as a target gene to distinguish species origin of human, porcine, sheep, bovine, and horse by huge amount of sequence multi alignment. Several primers were designed in the COX1 gene to give species specificity, and specific primers were screened by conventional PCR. After deciding specific primers, TaqMan probes were designed in the target region to endow species specificity. Single-plex real time PCR conditions were optimized for each species, and multiplex real time PCR were established with two groups. Group1 multiplex mixture includes the primers and probes for detecting human, porcine, and sheep, and Group2 mixture contains the primers and probes for determining bovine and horse. DNAs purified from 5 different clinical products were analyzed using the multiplex real time PCR, and the results showed that all products are originated from human placenta. The established methods were verified with inter-cross test by two institutes.
    The second project team also established the verification methods on human placenta using real time PCR to focus on mitochondrial D-loop region. On conclusion, our results may provide the adequate genetic analysis system to discriminate animal origin or human origin of human placental medicine.


    인태반은 의약품으로서 다양한 효능이 알려져 있으나 원료 공급의 부족으로 인해 동물의 태반이 인 태반으로 둔갑하여 사용될 가능성이 늘어남에 따라 동물태반과 인태반을 구별할 수 있는 유전학적구별 시스템을 확립하고, 확립된 시스템이 완제...

    인태반은 의약품으로서 다양한 효능이 알려져 있으나 원료 공급의 부족으로 인해 동물의 태반이 인 태반으로 둔갑하여 사용될 가능성이 늘어남에 따라 동물태반과 인태반을 구별할 수 있는 유전학적구별 시스템을 확립하고, 확립된 시스템이 완제품에서 잘 적용될 수 있도록 완제품으로부터 고농도, 고순도의 DNA 추출 방법을 최적화 시키는 것이 본 연구의 목표이다. 인태반 유래 의약품으로부터 DNA 추출 방법은 phenol/chloroform 방법을 응용하여 최적화 시켰다. 4 ml의 인태반 의약품 앰플로부터 추출한 DNA양을 positive control로부터 얻은 standard curve를 통하여 정량한 결과 약 100ng의 DNA가 추출되었다. 100 pg의 DNA는 real time PCR 10번을 수행하기에 충분한 양이며, DNA양을 증가시키고 싶은 경우에는 앰플 양을 늘리면 가능해진다. 사람, 돼지, 양, 말, 소의 genebank data를 모아서 multiple alignment로 분석하여 종간 특이적, 종내 보존적인 부분을 찾아 최종적으로 선정된 mitochondrial DNA의 cytochrome C oxidase 1 (COX1) gene에 대한 primer를 디자인하여 conventional PCR로 확인하였다. 결정된 target region 내에서 종내 보존적이고 종간 특이적인 TaqMan prob를 디자인하여 real time PCR로 최적의 probe를 선정한 후 사람, 돼지, 양, 소, 말을 특이적으로 증폭하며 서로 cross interaction이 없는 primers와 probes를 최종 선정하였다. Single-plex real time PCR로 최적화된 조건을 이용하여 두 group의 multiplex real time PCR 조건을 확립하였다. Group1 multiplex 반응은 사람, 돼지, 양의 primers와 probes를 혼합하여 최적화 하였고, Group2 multiplex 반응은 말, 소의 priemrs와 probes를 혼합하여 최적화 하였다. 최적화된 multiplex real time PCR 조건에서 4개 제조사의 5개 인태반 의약품으로부터 DNA를 추출하여 실험한 결과 모두 인태반 DNA 임이 확인되었다. 이 조건으로 제2세부연구자와 교차검증을 수행하여 확립된 시스템을 검증하였다. 제2세부연구자는 D-loop 부위를 특이적으로 검출할 수 있는 real time PCR 조건을 확립하였으며 5개의 인태반 의약품으로부터 DNA를 추출하여 확립된 조건을 테스트하였다.
    본 연구결과는 인태반 유래 의약품의 유전자분석 시험법에 적합한 방법으로써 동물태반과 인태반을 구별할 수 있는 유전학적 구별 시스템 확립 및 검증에 유용하게 이용될 것으로 사료된다.


  • 목차(Contents) 

    1. 용역연구개발과제 최종보고서 ...1
    2. 제출문 ...2
    3. 목차 ...3
    4. I. 총괄연구개발과제 요약문 ...4
    5. 1. 국문요약문 ...5
    6. 2. 영문요약문 ...7
    7. II. 총괄연구개발과제 연구결과 ...9
    8. 제1장 총괄연구개발과제의 목적 및 필요성 ...9...
    1. 용역연구개발과제 최종보고서 ...1
    2. 제출문 ...2
    3. 목차 ...3
    4. I. 총괄연구개발과제 요약문 ...4
    5. 1. 국문요약문 ...5
    6. 2. 영문요약문 ...7
    7. II. 총괄연구개발과제 연구결과 ...9
    8. 제1장 총괄연구개발과제의 목적 및 필요성 ...9
    9. 1.1 총괄연구개발과제의 목표 ...9
    10. 1.2 총괄연구개발과제의 목표달성도 ...10
    11. 1.3 총괄국내?외 기술개발 현황 ...11
    12. 1.4 총괄연구개발과정에서 수집한 국외과학기술정보 ...11
    13. 제2장 총괄연구개발과제의 내용 및 방법 ...12
    14. 1. 총괄연구개발의 추진전략 ? 방법 ...12
    15. 2. 총괄연구개발의 추진체계 ...13
    16. 제3장 총괄연구개발과제의 최종결과 및 고찰 ...13
    17. 제4장 총괄연구개발과제의 연구성과 ...14
    18. 4.1 총괄활용성과 ...14
    19. 4.2 총괄활용계획 ...15
    20. 제5장 총괄주요연구 변경사항 ...15
    21. 제6장 총괄참고문헌 ...15
    22. 제7장 총괄첨부서류 ...15
    23. III. 제(1)세부연구개발과제 연구결과 ...16
    24. 제1장 세부연구개발과제의 요약문 ...17
    25. 제2장 세부연구개발과제의 목적 ...19
    26. 2.1 세부연구개발과제의 목적 ...19
    27. 2.2 세부연구개발과제의 목표달성도 ...19
    28. 제3장 세부연구개발과제의 내용 및 방법 ...19
    29. 제4장 세부연구개발과제의 결과 및 고찰 ...26
    30. 제5장 세부참고문헌 ...33
    31. IV. 제(2)세부연구개발과제 연구결과 ...35
    32. 제1장 세부연구개발과제의 요약문 ...36
    33. 제2장 세부연구개발과제의 목적 ...39
    34. 2.1 세부연구개발과제의 목적 ...39
    35. 2.2 세부연구개발과제의 목표달성도 ...41
    36. 제3장 세부연구개발과제의 내용 및 방법 ...42
    37. 제4장 세부연구개발과제의 결과 및 고찰 ...44
    38. 제5장 세부참고문헌 ...50
    39. V. 표준운영절차 ...52
  • 참고문헌

    1. 전체(0)
    2. 논문(0)
    3. 특허(0)
    4. 보고서(0)

 활용도 분석

  • 상세보기

    amChart 영역
  • 원문보기

    amChart 영역