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보고서 상세정보

로타바이러스 항체 기준시약 개발 연구
Development of National Standard Reagents for Rotaviruses

  • 사업명

    식품의약품안전성관리

  • 과제명

    로타바이러스 항체 기준시약 개발 연구

  • 주관연구기관

    충북대학교
    Chungbuk National University

  • 연구책임자

    강신영

  • 보고서유형

    최종보고서

  • 발행국가

    대한민국

  • 언어

    한국어

  • 발행년월

    2005-11

  • 과제시작년도

    2005

  • 주관부처

    식품의약품안전청

  • 사업 관리 기관

    식품의약품안전청
    Korea Food & Drug Administration

  • 등록번호

    TRKO201000015810

  • 과제고유번호

    1470001168

  • 키워드

    로타바이러스.단크론항체.아군형.혈청형.VP4 발현.Rotavirus.Monoclonal antibody.Subgroup.Serotype.VP4 expression.

  • DB 구축일자

    2013-04-18

  • 초록 


    Rotaviruses are known to be one of the most important virus to cause gastroenteritis and severe diarrhea in young children in und...

    Rotaviruses are known to be one of the most important virus to cause gastroenteritis and severe diarrhea in young children in underdeveloped and developing countries as well as developed countries. For this reason, several countries including WHO have tried to develope rotavirus vaccines during last two decades. To confirm the efficacy of rotavirus vaccines developed in home and foreign countries, first of all, detection of rotavirus and prevalence of rotavirus serotypes in problemed area should be performed and it is essential to have serotype-specific standard anti-rotavirus sera or nucleic acid reagents. Serotype-specific standard anti-rotavirus sera or nucleic acid reagents are also essentially necessary to evaluate the rotavirus related products. The objective of this study is to make rotavirus-specific standard mono- and polyclonal antibodies to be used for epidemiological studies such as prevalence of rotaviral infection and serotypes and for an evaluation of rotavirus related products. From the results of validation test of previously developed i-ELISA for direct detection of rotaviruses from fecal samples, the sensitivity and specificity were 92.6% and 91.9%, respectively. In experiment to develop rotavirus serotyping (G3 and G4) methods from fecal samples, monoclonal antibodies (MAbs) used did not differentiate G3 from G4 in ELISA system in spite of their high neutralizing antibody titers. However, the developed ELISA system using MAbs could differentiate subgroup I from II with accuracy and would be used effectively for epidemiological studies of rotaviral infection. Several rotavirus VP4-specific MAbs were produced and characterized using 4 human rotavirus reference strains (Wa/G1P[8], DS-1/G2P[4], M/G3P[6], ST-3/G4P[6]). For VP4 antigen preparation to be used for making VP4-specific polyclonal antibodies and for studying immune responses against rotavirus infection, VP4 gene from Wa, DS-1 and ST3 rotavirus strain was cloned and expressed in baculovirus expression system and its properties were characterized. The VP4 gene in recombinant viruses was confirmed by PCR and expressed VP4 in baculovirus was confirm by IFA and Western blotting. The VP4-specific polyclonal antibodies were produced using expressed VP4 and characterized.


    로타바이러스는 어린 아이에 있어서 장염의 원인체 중 가장 중요한 바이러스로 후진국이나 개발 도상국 뿐만 아니라 선진국에서도 심한 설사를 일으키는 중요한 원인체로 알려져 있다. 이러한 이유로 로타바이러스에 대한 예방약 개발이 오래 전...

    로타바이러스는 어린 아이에 있어서 장염의 원인체 중 가장 중요한 바이러스로 후진국이나 개발 도상국 뿐만 아니라 선진국에서도 심한 설사를 일으키는 중요한 원인체로 알려져 있다. 이러한 이유로 로타바이러스에 대한 예방약 개발이 오래 전부터 WHO를 비롯하여 여러 나라에서 시도되고 있다. 국내 혹은 외국에서 개발된 로타바이러스 백신의 임상적인 효능성을 확인하기 위해서는 각 지역에 분포하는 로타바이러스의 검색 및 혈청형이 확인되어야 하며, 이를 위해 각각의 혈청형을 정확하게 검색, 확인할 수 있는 표준항체 또는 핵산 시약의 확보가 필수적이다. 또한 혈청형에 특이적으로 반응하는 표준항체 또는 핵산시약은 로타바이러스 관련 제품을 평가하는데 필수적으로 필요한 것이다. 본 연구에서는 로타바이러스 감염실태 및 로타바이러스 혈청형 분포에 대한 역학조사, 그리고 로타바이러스와 관련된 제품의 평가를 위해 로타바이러스에 특이적인 표준항체를 단크론항체와 복합항체 형태로 개발하는데 있다. 단크론항체와 복합항체를 이용하여 이미 확립한 간접 sandwich 효소면역법의 validation 검사를 위하여 일련의 야외 분변재료를 이용하여 민감도와 특이성을 조사한 결과, 각각 92.6%와 91.9%로 나타나 분변으로부터 직접 로타바이러스를 검출하는데 유용하게 사용될 것으로 생각된다. 분변으로부터 직접 로타바이러스 혈청형 (G3, G4)을 확인할 수 있는 효소면역법 확립 시험에서 시험에 사용된 각각의 혈청형에 특이적인 단크론항체는 높은 수준의 중화항체역가를 가지고 있음에도 불구하고 효소면역법에서는 반응성이 낮아 G3, G4의 감별이 불가능하였다. 하지만 과 아군(subgroup I, II)을 감별할 수 있는 효소면역법에서는 직접 분변을 이용하여 정확하게 subgroup I, II의 감별이 가능하여 로타바이러스 역학 연구에 유용하게 활용될 것으로 생각된다. 4개의 표준주 로타바이러스 (Wa/G1P[8], DS-1/G2P[4], M/G3P[6], ST-3/G4P[6])를 사용하여 로타바이러스 VP4에 특이적으로 반응하는 단크론항체를 생산하였으며 또한 각각의 VP4 단백에 특이적인 복합항체 생산 및 면역반응 조사에 필요한 항원을 생산하기 위하여 Wa, DS-1 그리고 ST-3 표준주로부터 VP4 유전자를 크로닝하여 진핵세포 발현체계인 배큘로바이러스에서 발현시키고 발현된 VP4 단백을 확인하고 이들의 특성을 규명하였다. 재조합바이러스에서 VP4 유전자는 PCR법으로 확인하였으며 발현된 VP4 단백은 IFA법 및 Western blotting법으로 확인하였다. 배큘로바이러스에서 발현된 VP4 단백을 대량 생산하여 정제하고 이를 실험동물에 접종하여 VP4에 특이적인 복합항체를 생산하였다.


  • 목차(Contents) 

    1. 연구결과보고서 ...1
    2. 제출문 ...2
    3. 연구결과보고서 요약문 ...3
    4. Project Summary ...4
    5. 목차 ...5
    6. 제1장 연구개발 목표 ...7
    7. 1.1 연구개발과제의 목표 ...7
    8. 1.2 연구개발과제의 목표 달성도 ...8
    9. 1.3 ...
    1. 연구결과보고서 ...1
    2. 제출문 ...2
    3. 연구결과보고서 요약문 ...3
    4. Project Summary ...4
    5. 목차 ...5
    6. 제1장 연구개발 목표 ...7
    7. 1.1 연구개발과제의 목표 ...7
    8. 1.2 연구개발과제의 목표 달성도 ...8
    9. 1.3 국내외 기술개발 현황 ...9
    10. 제2장 연구개발 내용 및 방법 ...11
    11. 제1절 로타바이러스 검출 시험법 확립 ...11
    12. 제2절 로타바이러스 VP4 특이항체 생산 ...20
    13. 제3장 연구개발 결과 ...29
    14. 제1절 로타바이러스 검출 시험법 확립 ...29
    15. 제2절 로타바이러스 VP4 특이항체 생산 ...51
    16. 제4장 연구결과 고찰 및 결론 ...65
    17. 1. 로타바이러스 검출 시험법 확립 ...65
    18. 2. 로타바이러스 VP4 특이항체 생산 ...66
    19. 제5장 연구개발 과제의 연구성과 ...67
    20. 5.1 활용성과 ...67
    21. 5.2 활용계획 ...68
    22. 제6장 기타 중요 변경사항 ...71
    23. 제7장 참고문헌 ...72
  • 참고문헌

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