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보고서 상세정보

보툴리눔 독소제제의 in vitro 확인시험법 연구
Study on the in vitro identification methods of Botulinum toxin products

  • 사업명

    ① 생물학적제제 기준규격 연구

  • 과제명

    보툴리눔 독소제제의 in vitro 확인시험법 연구

  • 주관연구기관

    식품의약품안전평가원

  • 연구책임자

    반상자

  • 참여연구자

    윤창용   이내리   이남훈   전형옥   김정환   최미섭  

  • 보고서유형

    최종보고서

  • 발행국가

    대한민국

  • 언어

    한국어

  • 발행년월

    2009-12

  • 과제시작년도

    2009

  • 주관부처

    식품의약품안전청

  • 사업 관리 기관

    식품의약품안전청
    Korea Food & Drug Administration

  • 등록번호

    TRKO201000015843

  • 과제고유번호

    1475004545

  • 키워드

    보툴리눔 독소.확인시험.중화항체.botulinum toxin.identification method.ELISA.neutralizing antibody.in vitro.

  • DB 구축일자

    2013-04-18

  • 초록 


    This study was started for investigating the possibility of switching the current in vivo method to in vitro method in accordance...

    This study was started for investigating the possibility of switching the current in vivo method to in vitro method in accordance with the international trend. ELISA were used as in vitro identification methods, and the antibodies which were necessary in tests were purchased from commercial provider Abcam Inc. or were kindly provided by Allergan. Botulinum type A toxoids were purchased from List Biological Laboratories and were kindly provided from Hugel. Six kinds of botulinum toxin medicine were tested by ELISA for the LOD, linearity, and specificity. Five of them are type A medicine and the other is type B medicine. The ELISA method by using antibodies provided by Allergan showed that the test detected botulinum toxin in toxin medicine with a limit to 1 U per well and with satisfying linearity (R2>0.99). But this ELISA method could not detected botulinum toxin type B in type B medicine with the same concentration of toxin A product. Therefore, toxin specificity between toxin A and toxin B was proved in ELISA method by using Allergan's antibodies. The criteria for positive identification was established through the analysis of experiment results. Two kinds of type A toxoid were also detected with a linearity of R2> 0.99, but there were the difference in response values between two toxoid. However, it might be possible to use these materials as a positive control in ELISA test. The ELISA method by using antibodies purchased from Abcam were not able to detect botulinum toxins in botulinum toxin medicine. Botulinum pharmaceutical products have pharmaceutical excipients such as human serum albumin. It is believed that the excipients lowered the sensitivity for the botulinum toxin in ELISA. In conclusion, it was proved that ELISA test by Allergan's antibodies was able to detect botulinum toxin A in botulinum medicine (900kD). Also the criteria for the positive identification was set above 4-fold OD450 value of blank. The result of this study will be applied to the fast identification test, which requires fast test results, of illegal botulinum toxin product.


    본 연구는 보툴리눔 독소 A형의 현행 in vivo 확인시험법을 국제 추세에 따른 in vitro 시험법으로 전환하기 위한 적용 가능성 탐색으로 시작되었다. in vitro 시험법으로는 ELISA 시험법을 사용하였으며, 구매할 수 ...

    본 연구는 보툴리눔 독소 A형의 현행 in vivo 확인시험법을 국제 추세에 따른 in vitro 시험법으로 전환하기 위한 적용 가능성 탐색으로 시작되었다. in vitro 시험법으로는 ELISA 시험법을 사용하였으며, 구매할 수 있는 또는 업체 제공될 수 있는 항체 및 톡소이드로서 현행 완제의약품의 확인시험에 가능한지를 시험 연구하였다. 시험에 사용된 항체들은 Allergan사로부터 제공받은 항체들과 Abcam사로부터 구매한 항체들이었다. 양성대조군으로 사용한 톡소이드 A형 1종은 List Biological Laboratories에서 구매하고, 다른 1종은 국내 휴젤사로부터 제공받았다. 확인시험에 사용된 독소 완제품은 총 6개로서 이중 A형은 5종, B형은 1종이었다. Allergan사로부터 입수한 항체들을 이용하여 독소 완제의약품들에 대해서 ELISA로 시험한 결과, 보툴리눔 독소 A형 완제의약품에 대해서는 well 당 1 U 까지의 검출한도를 보이며, R2 > 0.99 이상의 직선성을 보이며, B형 완제의약품에 대해서는 동량의 A형 독소 대비 거의 검출되지 않아 A형 독소 특이성을 보임을 확인하였다. 상기 실험에 따른 결과값 분석을 통해서 900kD의 보툴리눔 독소 A형 완제의약품의 확인시험 양성 판정기준을 설정하였다. 두 가지 톡소이드에 대해서도 검출되며 R2 > 0.99 이상의 직선성을 보이며, 두 제품의 표시 용량 대비 반응값의 차이가 있으나, ELISA 시험의 적합성 평가지표용 물질로는 사용 가능할 것으로 판단된다. Abcam사로부터 구매한 항체들로 ELISA시험을 진행하였으나, 독소 완제의약품의 보툴리눔 독소를 검출하지를 못하였다. 이는 완제의약품 내에 포함되어있는 human serum albumin 등 부형제로 항체들의 감도가 낮아진 것으로 추정된다. 이상의 결과들로부터 Allergan사의 항체를 사용하여 900kD 보툴리눔 독소 A형 완제품에서의 보툴리눔 독소 A형의 검출이 가능함을 확인하였으며, 양성 판성의 기준을 음성대조군 대비 4배 이상으로 설정하였다. 본 연구 성과를 향후 보툴리눔 독소의 신속한 확인을 요하는 불법 보툴리눔 독소의약품의 검정시험에 활용하고자 한다.


  • 목차(Contents) 

    1. 최종보고서 ...1
    2. 표지 ...2
    3. 국문요약문 ...3
    4. SUMMARY ...4
    5. 목차 ...6
    6. I. 연구개발과제 연구결과 ...7
    7. 제1장 연구개발과제의 개요 ...7
    8. 제1절 연구개발과제의 목표...7
    9. 제2절 연구개발과제의 필요성...7...
    1. 최종보고서 ...1
    2. 표지 ...2
    3. 국문요약문 ...3
    4. SUMMARY ...4
    5. 목차 ...6
    6. I. 연구개발과제 연구결과 ...7
    7. 제1장 연구개발과제의 개요 ...7
    8. 제1절 연구개발과제의 목표...7
    9. 제2절 연구개발과제의 필요성...7
    10. 제2장 총괄연구개발과제의 국내?외 연구개발 현황 ...9
    11. 제1절 보툴리눔 A형 독소의 in vitro 확인 시험법...9
    12. 제3장 연구개발과제의 연구수행 내용 및 결과 ...10
    13. 제1절 Allergan 사 항체를 이용한 보툴리눔 독소 완제의약품의 검출시험 (ELISA)...10
    14. 제2절 Abcam 사 항체를 이용한 보툴리눔 독소 완제의약품의...24
    15. 제4장 연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ...27
    16. 제5장 연구개발과제의 목표달성도 및 관련분야에 기여도 ...29
    17. 제1절 목표달성도...29
    18. 제2절 관련분야 기여도...29
    19. 제6장 연구개발과제의 연구개발결과 활용계획 ...30
    20. 제1절 활용성과...30
    21. 제2절 활용계획...31
    22. 제7장 참고문헌 ...32
  • 참고문헌

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