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보고서 상세정보

한약재 생리활성 성분분리 및 효능 유전자 확인 연구-감초, 지실
Isolation of biologically active compounds from Glycyrrhiza uralensis and Poncirus trifoliata and identification of genes related to the activity of those compounds

  • 사업명

    독성연구개발

  • 과제명

    한약재의 생리활성성분 분리 및 효능유전자 확인 연구(감초, 지실)

  • 주관연구기관

    영남대학교
    YeungNam University

  • 연구책임자

    이승호

  • 보고서유형

    최종보고서

  • 발행국가

    대한민국

  • 언어

    한국어

  • 발행년월

    2006-10

  • 과제시작년도

    2006

  • 주관부처

    식품의약품안전청

  • 사업 관리 기관

    식품의약품안전청
    Korea Food & Drug Administration

  • 등록번호

    TRKO201000015938

  • 과제고유번호

    1470001496

  • 키워드

    감초.지실.유효성분.HPLC 정량법.효능유전자.glycyrol.glycyrrhizin.naringin.neohesperidin dihydrochalcone.aurapene.Glycyrrhizae Radix.Ponciri Fructus.Active component.HPLC Quantitation.Glycyrrhizin.Poncirin.

  • DB 구축일자

    2013-04-18

  • 초록 


    For the standardization by HPLC and a HPLC-MS/MS analytical methods and microarray technology of Glycyrrhiza uralensis and Poncir...

    For the standardization by HPLC and a HPLC-MS/MS analytical methods and microarray technology of Glycyrrhiza uralensis and Poncirus trifoliata, Fourteen compounds from G. uralensis and P. trifoliata were isolated. Among the isolated compounds, four compounds from P. trifoliata were new compounds.
    In the second sub-project, we have developed both a HPLC and a HPLC-MS/MS analytical methods to determine five or four marker compounds from herbal drugs, Glycyrrhiza uralensis and Poncirus trifoliata. Calibration curve showed good linearity across wide concentration ranges of the marker compounds. The simple analytical procedure has shown good accuracy and precision, and therefore is proposed an efficient method for fingerprinting analysis as well as quality control of the herbal drug. Quantities of marker compounds from collected samples of Glycyrrhiza and Poncirus fruit were assayed.
    In the third sub-project, we have characterized the effects of single compounds isolated from Glycyrrhiza uralensis and Poncirus trifoliata for the evaluation of global expression patterns in human and rat cell lines by utilizing microarray technology. We identified gene markers that could be useful to evaluate the effects of single compounds. We also could provided a set of gene clusters that is for database construction. In the first year of the project, we performed a research on characterization and standardization of single compounds from Glycyrrhiza glabra - Ammonium glycyrrhizinate (AG), glycyrol (GC), glycyrrhizine (GH) and 70% EtOH extracts, and we have found more than twenty final target genes. In the second year of this project, we focused on single compounds from Poncirus trifoliate ? naringin (NA), neohesperidin dihydrochalcone(ND), aurapene(AU) and 70% EtOH extracts and examined their anti-allergy effects by using Mast cell. Furthermore, we analyzed their effects on the induction and repression of gene expression levels and more than twenty genes was selected as final targets.


    감초와 지실의 유효성분, 효능유전자를 이용한 표준화를 위하여 다음과 같은 연구를 수행하였다.
    1. 감초와 지실의 70% EtOH 엑스를 조제하여 분석용, biochipdusrn용, 활성연구용으로 제공하였다.
    2. 감초의 ...

    감초와 지실의 유효성분, 효능유전자를 이용한 표준화를 위하여 다음과 같은 연구를 수행하였다.
    1. 감초와 지실의 70% EtOH 엑스를 조제하여 분석용, biochipdusrn용, 활성연구용으로 제공하였다.
    2. 감초의 MeOH 엑스로부터 14종, 지실의 MeOH 엑스로부터 28종의 화합물을 분리하여 구조를 결정하였으며, 이 중에서 지실에서 분리된 4종의 화합물은 신규화합물이었다.
    3. 감초와 지실에서 분리한 화합물 중에서 각각 10종, 15종을 표준품으로 제공하였다.
    4. 감초와 지실의 유효성분으로 결정된 각 3종의 화합물을 대량 분리하여 제공하였다.
    제 2 세부과제에서는 감초의 지표성분으로 liquiritigenin, liquiritin, glycycoumarin, prunetin 및 glycyrrhizin 등 5종을 선택하여 HPLC-UV법과 HPLC-MS/MS법으로 동시정량을 설정하였다. 지실은 지표성분으로 HPLC-UV법에서는 poncirin, naringin, hesperidin 및 neohesperidin dihydrochalcone 등 4종을 선택하여 분석하였으며, HPLC-MS/MS법에서는 poncirin, naringin, hesperidin, neohesperidin dihydrochalcone, 25-methoxyhispidol A, isoimperatorin, aurapten, imperatorin, phellopterin, umbelliferone, scopoletin, heraclenol 3''-Me ester 및 bergapten등 13종을 시도하였으나, poncirin, naringin, hesperidin, isoimperatorin, aurapten, imperatorin 및 phellopterin등 7종만 함유되어 있는것을 확인하고 동시정량을 설정하였다. 동시정량법에 대한 validation을 실시함으로써 동시분석법에 대한 타당성을 입증하였다. 감초와 지실의 시중 유통품 (감초 22종, 지실 21종)에 대해 활성성분의 함량을 측정하였다.
    7. 한약재에서 생리활성유효성분의 생물학적 특성을 규명하고자 인간 및 랫트 세포주에서 발현되는 유전자에 미치는 영향을 microarray를 통하여 조사하여 유전자 marker를 설정하였고 이를 통하여 약리 유전자에 대한 database 구축을 위한 기반 연구를 시행하였다. 본연구의 1차년도를 통하여 감초의 유효성분 중 glycyrol (GC), glycyrrhizine (GH) 및 70% EtOH 추출물과 glycyrrhizine의 유도체인 ammonium glycyrrhizinate (AG)에 대한 과학화 및 표준화 연구를 시행하였으며 이러한 연구를 통하여 각 활성성분에 대하여 최종 20종 이상의 목표유전자를 찾았다. 2차년도에서는 지실의 유효성분 중 naringin (NA), neohesperidin dihydrochalcone (ND), aurapene (AU) 및 70% EtOH 추출물을 이용하였으며 이러한 물질이 가지는 항 알러지 효과를 비만세포에서 검정하였으며 어떠한 유전자의 발현에 변화를 유도하는 지에 대한 연구를 시행하여 최종목표인 20개 이상의 목표 유전자를 설정하였다
    이와 같은 연구 성과는 향후 감초와 지실의 효능유전자를 이용한 분석법 및 유효성분을 이용한 동시 분석법의 확립에 응용될 것이며, 다른 한약재의 효능유전자연구 및 유효성분을 이용한 동시분석법 확립에 응용될 것이다.


  • 목차(Contents) 

    1. 연구과제 제안서(RFP) ...1
    2. 용역연구사업 연구결과보고서 ...3
    3. 표지 ...4
    4. 제출문 ...6
    5. 목차 ...7
    6. I. 연구개발결과 요약문 ...9
    7. 국문요약문 ...9
    8. 영문요약문 ...10
    9. II. 총괄연구개발과제 연구결과 ...11...
    1. 연구과제 제안서(RFP) ...1
    2. 용역연구사업 연구결과보고서 ...3
    3. 표지 ...4
    4. 제출문 ...6
    5. 목차 ...7
    6. I. 연구개발결과 요약문 ...9
    7. 국문요약문 ...9
    8. 영문요약문 ...10
    9. II. 총괄연구개발과제 연구결과 ...11
    10. 제1장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ...11
    11. 1.1 총괄연구개발과제의 목표 ...11
    12. 1.2 총괄연구개발과제의 목표달성도 ...11
    13. 1.3 국내.외 기술개발 현황 ...12
    14. 제2장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 방법 ...14
    15. 2.1 연구내용 ...14
    16. 2.2 연구방법 ...14
    17. 제3장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 결과 ...18
    18. 3.1 제1세부과제 ...18
    19. 3.2 제2세부과제 ...18
    20. 3.3 제3세부과제 ...27
    21. 제4장 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ...36
    22. 제5장 총괄연구개발과제의 연구성과 ...39
    23. 5.1 활용성과 ...39
    24. 5.2 활용계획 ...41
    25. III. 제1세부연구개발과제 연구결과 ...42
    26. 제1장 세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ...43
    27. 1.1 세부연구개발과제의 목표 ...43
    28. 1.2 세부연구개발과제의 목표달성도 ...46
    29. 1.3 국내.외 기술개발 현황 ...46
    30. 제2장 세부연구개발과제의 연구대상 및 방법 ...48
    31. 제3장 세부연구개발과제의 최종 연구개발 결과 ...49
    32. 3.1 감초로부터 생물활성 물질의 분리 ...51
    33. 3.2 지실로부터 생물활성 물질의 분리 ...54
    34. 3.3 감초의 70% EtOH 엑스의 조제 ...62
    35. 제4장 세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ...64
    36. 4.1 감초의 생물활성 물질의 구조 ...64
    37. 4.2 지실의 생물활성 물질의 구조 ...68
    38. 4.3 결론 ...75
    39. 제5장 세부연구개발과제의 연구성과 ...76
    40. 5.1 활용성과 ...76
    41. 5.2 활용계획 ...79
    42. 제6장 참고문헌 ...80
    43. 제7장 첨부서류 ...86
    44. III. 제2세부연구개발과제 연구결과 ...93
    45. 제1장 세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ...94
    46. 1.1 세부연구개발과제의 목표 ...94
    47. 1.2 세부연구개발과제의 목표달성도 ...94
    48. 1.3 국내.외 기술개발 현황 ...94
    49. 제2장 세부연구개발과제의 연구대상 및 방법 ...95
    50. 제3장 세부연구개발과제의 최종 연구개발 결과 ...113
    51. 제4장 세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ...155
    52. 제5장 세부연구개발과제의 연구성과 ...158
    53. 5.1 활용성과 ...158
    54. 5.2 활용계획 ...159
    55. 제6장 참고문헌 ...160
    56. 제7장 첨부서류 ...163
    57. III. 제3세부연구개발과제 연구결과 ...166
    58. 제1장 세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ...167
    59. 1.1 세부연구개발과제의 목표 ...167
    60. 1.2 세부연구개발과제의 목표달성도 ...168
    61. 1.3 국내.외 기술개발 현황 ...170
    62. 제2장 세부연구개발과제의 연구대상 및 방법 ...172
    63. 2.1 연구내용 ...172
    64. 2.2 연구방법 ...173
    65. 제3장 세부연구개발과제의 최종 연구개발 결과 ...176
    66. 3.1 제1차년도 연구결과 (감초) ...176
    67. 3.2 제2차년도 연구결과 (지실) ...215
    68. 제4장 세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ...234
    69. 제5장 세부연구개발과제의 연구성과 ...235
    70. 5.1 활용성과 ...235
    71. 5.2 활용계획 ...236
    72. 제6장 참고문헌 ...237
    73. 제7장 첨부서류 ...238
  • 참고문헌

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