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보고서 상세정보

생약(한약) 등의 90일 반복투여독성시험(황금)
13wk Repeated Dose Toxicity of a Scutellaria baicalensis Geogri

  • 사업명

    식품의약품안전성관리

  • 과제명

    생약(한약) 등의 90일 반복투여, 독성시험(황금)

  • 주관연구기관

    (주)바이오톡스텍

  • 연구책임자

    김수현

  • 보고서유형

    최종보고서

  • 발행국가

    대한민국

  • 언어

    한국어

  • 발행년월

    2005-11

  • 과제시작년도

    2005

  • 주관부처

    식품의약품안전청

  • 사업 관리 기관

    식품의약품안전청
    Korea Food & Drug Administration

  • 등록번호

    TRKO201000016036

  • 과제고유번호

    1470001547

  • 키워드

    황금.반복독성.유전독성.Scutellaria baicalensis Geogri.repeated dose toxicity.genotoxicity.

  • DB 구축일자

    2013-04-18

  • 초록 


    [1] 90 days repeated dose toxicity study of Scutellaria baicalensis Geogri in Rats
    In this GLP study, 6 main study groups of F...

    [1] 90 days repeated dose toxicity study of Scutellaria baicalensis Geogri in Rats
    In this GLP study, 6 main study groups of F344 rats/10/sex were given 0, 313, 625, 1250, 2500 and 5000 mg/kg Scutellaria baicalensis Geogri for 90 days. To select the dose of 90-day repeated dose toxicity study, test item was orally administered to male and female rats at dosage of 0, 313, 625, 1250, 2500 and 5000 mg/kg for 14 days. In the result of the study, there were no treatment-related toxicity of 5000mg/kg. Therefore, the high dose of 90-days repeated dose toxicity was established as
    5000 mg/kg and was established as 2500, 1250, 625 and 313 mg/kg in the common ratio of 0.5, 5 times of intake per day of the test item.
    Standard endpoint in this study included mortality, clinical observation, change of body weights, analysis on food consumption, urinalysis, hematologic examination, serum biochemistry, analysis of organ weights, gross anatomic pathology and histopathology. Sperm morphology and vaginal cytology were conducted.
    All animals survived to the scheduled termination. There were no treatment-related changes in body weight.
    There were decrease of food consumption in 1250, 2500 and 5000 male treatment group and 5000 mg/kg female treatment group.
    In clinical signs, there were treatment-related chromaturia at dosage of 625, 1250, 2500 and 5000 mg/kg female treatment group.
    In urinalysis, there were decrease of sodium in 625, 1250, 2500 and 5000 mg/kg female treatment group.
    In hematology, there were decrease of reticulocyte in 625, 1250, 2500 and 5000 mg/kg male treatment group.
    There were no serum biochemistry.
    No significant differences in sperm morphology in male and estrous cycle in female were apparent.
    There were no treatment-related changes in absolute and relative organ weights, necropsy findings and histophathological findings.
    Based on these results, no observed effect level(NOEL) is considered to be 300 mg/kg in male and female.
    [2] Genotoxicity study of Scutellaria baicalensis Geogri
    1) Bacterial Reverse mutation test
    This study in terms of the Scutellaria baicalensis Geogri, to determine a mutagenic potential is performed using histidine-requiring bacterial strain, Salmonella typhimurium (TA98, TA100, TA1535, and TA1537 strain) and tryptophan-requiring bacterial strain, Escherichia coli (WP2uvrA(pKM101)) with and without S9 metabolic activation system.
    To determine a dose range in the main test, the dose-finding study was performed with 5 dose levels such as 312.5, 625, 1250, 2500 and 5000 μg/plate regardless of application of S9 metabolic activation system. In the TA100 and TA1537 strains, the number of revertant colonies was reduced with S9 metabolic activation system. And a precipitation of the test sunstance was not observed at all dose levels regardless of application of S9 metabolic activation system.
    Accordingly, the highest dose, 5000 $\mu$g/plate, in the preliminary test was decided as the highest dose in the main test; and it was divided by the common ratio, 2, to make 5 dose groups including the highest dose.
    The number of revertant colonies in terms of test substance was not increased dose-dependently regardless of application of S9 metabolic activation system in the treatment groups; and was not increased more than 2 fold as compared with that of the negative control group. At the highest dose of TA100 and TA1537, the number of revertant colonies was reduced regardless of application of S9 metabolic activation system. A precipitation in relation to the test substance were not observed regardless of application of S9 metabolic activation system.
    As a result, the test substance, did not show the genetoxic potential under the condition of this study.
    2) Chromosome Aberration Test using Mammalian cultured cells
    The chromosome aberration test was performed under the condition follows short time treatment without S9 and continuous treatment with S9 to examine a mutagenic potential of the test substance using Chinese hamster lung (CHL) cell.
    According to the MTT assay to determine the highest dose, there was no cytotoxicity regardless of application of S9 metabolic activation system.
    Therefore, the main test was performed with 3 dose levels of treatment groups such as 1250, 2500 and 5000 μg/mL including negative and positive control (MMC : 0.05 $\mu$g/mL, B[a]P : 20 $\mu$g/mL) groups.
    The test substance did not induce the numerical and structural chromosome aberrations regardless of application of S9 metabolic activation system as compared with that of the negative control group.
    In conclusion, the test substance did not induce the chromosomal aberration under the condition of this study.
    3) In vivo Micronucleus test in mice
    This study was designed to determine the mutagenic potential of the test substance in the micronucleus test using bone marrow cells in ICR mice. The test substance (500, 1000 and 2000 mg/kg) and vehicle for the treatment and negative control group, respectively, were administered by gavage. The positive control (MMC mg) is administered intraperitoneally.
    In 24 hours, the bone marrow cells were collected at the femur and made a samples to observe the appearance of induction of micronucleus.
    There were no significant difference in appearance rate of micronucleated polychromatic erythrocytes (MNPCEs) in polychromatic erythrocytes (PCEs) between treatment and control groups. In addition, PCE/(PCE+NCE) ratio did not show sign of cytotoxicity.
    In conclusion, the test substance did not induce micronucleated polychromatic erythrocytes (MNPCEs) in bone marrow cells in mice.


    [1] 90일 경구 반복독성시험
    황금추출물에 대한 독성을 평가하고자, F344 rat 암·수 각각 60마리에 0, 313, 625, 1250, 2500, 5000 mg/kg의 농도로 90일간 강제 경구 투여하였다. 시험물질의 ...

    [1] 90일 경구 반복독성시험
    황금추출물에 대한 독성을 평가하고자, F344 rat 암·수 각각 60마리에 0, 313, 625, 1250, 2500, 5000 mg/kg의 농도로 90일간 강제 경구 투여하였다. 시험물질의 투여용량은 투여가능 최대농도 5000 mg/kg을 기준으로 공비 0.5를 적용하여 2500, 1250, 625 및 313mg/kg 용량으로 14일 반복투여 용량결정시험을 실시한 결과, 암·수 시험물질투여군에서 황금추출물에 의한 체중변화, 장기중량변화 및 부검시 육안소견이 관찰되지 않았다. 따라서, 90일 반복투여 독성시험의 고용량은 5000 mg/kg으로, 공비 0.5를 적용하여 2500, 1250, 625 및 313mg/kg의 용량을 설정하였다.
    90일 반복투여 독성시험의 투여기간동안 일반증상, 체중, 사료섭취량, 뇨검사, 혈액학적 및 혈액 생화학적 검사를 수행하였다. 생식독성 검사로서 부검시 정자형태검사와 관찰기간동안 질세포 검사를 수행하였다. 부검시 체내외 장기조직에 대하여 육안적 관찰 및 장기무게를 측정하였고, 주요장기에 대해 조직병리학적 검사를 수행하였다.
    관찰기간동안 황금추출물에 의한 사망례 및 체중변화는 관찰되지 않았다.
    관찰기간 동안 수컷 1250, 2500 및 5000 mg/kg 투여군 및 암컷 5000 mg/kg 투여군에서 시험물질투여에 기인한 것으로 사료되는 사료섭취량의 감소가 관찰되었다.
    일반증상은 암컷 625, 1250, 2500 및 5000 mg/kg 투여군에서 시험물질투여에 기인한 것으로 사료되는 착색뇨가 관찰되었다.
    뇨검사 결과, 암컷 625, 1250, 2500 및 5000 mg/kg 투여군에서 시험물질투여에 의한 나트륨 감소가 관찰되었다.
    혈액학적 검사결과, 수컷 625, 1250, 2500 및 5000 mg/kg 투여군에서 시험물질투여에 의한 망상적혈구백분율의 감소가 관찰되었다.
    혈액 생화학적 검사에서 시험물질에 의한 영향은 관찰되지 않았다.
    정자형태학 검사 결과, 수컷 대조군 및 시험물질투여군에서 시험물질에 의한 영향은 없는 것으로 사료된다.
    암컷 성주기에 있어서, 시험물질투여에 기인한 영향은 없는 것으로 판단되었다.
    장기중량 측정 결과, 암·수 시험물질투여군에서 시험물질투여에 기인한 영향은 관찰되지 않았다.
    부검결과, 암·수 시험물질투여군에서 시험물질에 기인하였다고 사료되는 특이한 부검소견은 관찰되지 않았다.
    조직병리학적 검사 결과, 암·수 시험물질투여군에서 시험물질에 기인한 소견은 관찰되지 않았다.
    이상과 같이, 황금추출물에 대한 90일 경구 반복투여 독성시험을 실시한 결과, 암컷 1250, 2500 및 5000 mg/kg 투여군에서 투여 후 착색뇨가 용량 의존적으로 관찰되어 시험물질에 의한 영향이 관찰되었다. 수컷 1250, 2500 및 5000 mg/kg 투여군 및 암컷 5000 mg/kg 투여군에서 사료섭취량의 감소에 대한 시험물질의 영향이 인정된다. 뇨검사 결과, 암컷 625, 1250, 2500 및 5000 mg/kg 투여군에서 나트륨의 유의성 있는 증가가 관찰되어 시험물질에 의한 영향이 인정된다. 혈액학적 검사 결과, 수컷 625, 1250, 2500 및 5000 mg/kg 투여군에서 망상적혈구백분율에서 영향이 관찰되었다.
    따라서, 황금추출물의 랫드를 이용한 90 일 경구투여 독성시험을 실시한 결과, 무독성량 (NOAEL)은 암·수 모두 313 mg/kg으로 사료된다.
    [2] 유전독성시험
    1) 세균을 이용한 복귀돌연변이 시험
    황금추출물의 변이원성에 대해서, 살모넬라균 (TA98, TA100, TA1535, TA1537주) 및 대장균 (WP2uvrA(pKM101)균주)을 이용하여 변이원성시험 (비대사활성화 및 대사활성화인 경우)을 실시하였다. 본시험의 용량을 설정하기 위해서 312.5, 625, 1250, 2500 및 5000 $\mu$g/plate의 용량으로 용량설정시험을 실시한 결과, 대사활성화의 TA100 및TA1537균주에서 생육저해가 관찰되었다. 시험물질에 의한 석출은 모든 시험균주에서 관찰되지 않았다. 본시험에서는 용량설정시험에서의 최고용량인 5000 $\mu$g/plate를 최고용량으로 설정하고, 이하 공비 2로 최고용량을 포함한 5용량으로 시험을 수행하였다.
    모든 시험물질용량군에서는 대사활성화계의 적용유무에 관계없이, 황금추출물에 의한 콜로니수는 용량의존적으로 증가되지 않았으며 음성대조군과 비교하여 2배 이상의 증가도 인정되지 않았다. 시험물질에 의한 생육저해는 대사활성화의 TA100 및 TA1537 균주의 최고용량에서 관찰되었다. 시험물질에 의한 석출은 대사활성화계 적용유무에 관계없이 모든 시험균주에서 관찰되지 않았다.
    이상의 결과로부터, 해당 시험조건 하에서 황금추출물의 복귀돌연변이 유발성은 음성으로 판정 되었다.
    2) Chinese Hamster Lung (CHL)배양세포를 이용한 염색체이상시험
    CHL(Chinese Hamster Lung) 배양세포를 이용하여 단시간처리법의 비대사활성화 및 대사활성화인 경우, 연속처리법의 24시간 배양으로 시험물질 황금추출물의 염색체이상의 유발성을 검토 하였다.
    최고용량를 설정하기 위하여 세포증식억제시험을 실시한 결과, 대사활성화 적용유무에 관계없이 세포독성이 나타나지 않았기 때문에 1250, 2500, 5000 μg/mL의 3단계 시험물질용량군과 음성대조군, 양성대조군(MMC : 0.05 $\mu$g/mL, B[a]P : 20 $\mu$g/mL)으로 시험을 실시하였다.
    모든 시험물질농도군에서 구조이상을 가진 세포의 출현빈도와 숫적이상을 가진 세포의 출현빈도는 대사활성화계 적용여부에 관계없이 음성대조군에 비해 증가되지 않았다.
    이상의 결과로부터, 본시험 조건하에서 황금추출물은 염색체이상을 유발하지 않는 물질로 판단 된다.
    3) 마우스를 이용한 소핵시험
    황금추출물의 마우스 골수세포에 대한 소핵유발성 유무를 평가하여 유전독성 유무를 검토하였다.
    황금추출물 1250, 2500, 5000 mg/kg의 용량과, 음성대조군 및 양성대조군인 Mitomycin C 2 mg/kg 투여군을 설정한 후, 음성대조군과 시험물질투여군은 경구투여하고, 양성대조군은 복강 투여하여 최종 투여 후 24시간 후에 대퇴골로부터 골수세포를 채취, 도말하여 소핵유발빈도를 검경하였다.
    시험결과, 모든 시험물질투여군은 소핵유발 빈도에 있어서 음성대조군과 비교시 유의성 있는 차이는 보이지 않았다. 세포독성의 지표인 PCE/(PCE+NCE)의 비율은 모든 시험물질 투여군에서 음성대조군과 비교시 시험물질에 의한 유의성이 관찰되지 않았다.
    이상의 결과로 본 시험 조건하에서 시험물질인 황금추출물은 마우스 골수세포의 소핵형성에 영향을 주지 않는 것으로 판단된다.


  • 목차(Contents) 

    1. 용역연구사업 연구결과보고서 ...1
    2. 제출문 ...2
    3. 요약문 ...3
    4. Summary ...6
    5. 목차 ...9
    6. 제1장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ...10
    7. 1.1 총괄연구개발과제의 목표 ...10
    8. 1.2 총괄연구개발과제의 목표달성도 ...11...
    1. 용역연구사업 연구결과보고서 ...1
    2. 제출문 ...2
    3. 요약문 ...3
    4. Summary ...6
    5. 목차 ...9
    6. 제1장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ...10
    7. 1.1 총괄연구개발과제의 목표 ...10
    8. 1.2 총괄연구개발과제의 목표달성도 ...11
    9. 1.3 국내.외 기술개발 현황 ...12
    10. 제2장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 방법 ...13
    11. 1절. 연구내용 ...13
    12. 제3장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 결과 ...36
    13. 가. 14일 반복투여 용량결정시험 (예비시험) ...36
    14. 나. 90일 경구 반복투여 독성시험 (본시험) ...36
    15. 다. 세균을 이용한 복귀돌연변이 시험 ...40
    16. 라. 포유류 배양세포를 이용한 염색체이상시험 ...40
    17. 마. 마우스를 이용한 소핵시험 ...41
    18. 바. 14일 반복투여 용량결정시험의 Figure, Table 및 Appendix ...42
    19. 사. 90일 반복투여 독성시험 Figure, Table 및 Appendix ...69
    20. 아. 세균을 이용한 복귀돌연변이시험의 Figure 및 Table ...236
    21. 자. 포유류 배양세포를 이용한 염색체이상시험의 Figure 및 Table ...241
    22. 차. 마우스를 이용한 소핵시험의 Table ...245
    23. 제4장 총괄연구개발과제의 연구개발목표 달성도 및 활용방안 ...254
    24. 1절. 연구개발 목표 달성도 및 기대효과 ...254
    25. 2절. 활용방안 ...254
    26. 제5장 총괄연구개발결과의 연구성과 ...255
    27. 5.1 활용성과 ...255
    28. 5.2 활용계획 ...256
    29. 제6장 기타 중요변경사항 ...257
    30. 제7장. 참고문헌...258
  • 참고문헌

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