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보고서 상세정보

Cytokine의 in vitro 대체 시험법 (II)
Establishment of in vitro cytokine assay-II

  • 주관연구기관

    한국생명공학연구원
    Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology

  • 연구책임자

    윤도영

  • 보고서유형

    최종보고서

  • 발행국가

    대한민국

  • 언어

    한국어

  • 발행년월

    2002-11

  • 주관부처

    식품의약품안전청

  • 사업 관리 기관

    식품의약품안전청
    Korea Food & Drug Administration

  • 등록번호

    TRKO201000016337

  • 키워드

    대체시험법 II.IL-1.IL-18.In vitro assay.cytokine.

  • DB 구축일자

    2013-04-18

  • 초록 


    This study is focused on the establishment of in vitro assays for the biologically active cytokines such as IL-1 and IL-18 which ...

    This study is focused on the establishment of in vitro assays for the biologically active cytokines such as IL-1 and IL-18 which enhance or recover the reduced immune responses of patients administered with anticancer drugs. IL-1 and IL-18 are being used as immunomodulating agents. In vivo assays for these biological response modifiers are time consuming, expensive due to animal experiment and inaccurate depending on animals. In order to replace in vivo test, Th2 helper cell line DlOS, a subclone of Type 2 (Th2) DIOG4.1, which is responded and proliferated by only IL-1 even in the absence of co-mitogen, has been used. DlOS cells expressing a lots of IL-1R type I (IL-IRI) and IL-1R accessory protein (IL-1RAcP) were cloned and maintained. DlOS cells were proliferated at the minimal concentration of IL-1β(2.5 + 0.5 pg/ml) in the absence of co-mitogen. In addition, in order to establish in vitro test for bioactive IL-18, NKO. a subclone of natural killer (NK) cells has been used. The surface IL-18 receptor on NKO cells were increased by IL-12 and NKO cells produced IFN-γ by IL-18 coincubated with IL-12. Mammalian expression pcDNA3.1 vector or pLXN retroviral vector were used for the expression of IL-12p40 (pcDNA3.1/IL-12p40. pLXN/IL-12p40). Those expression vectors were transfected into NKO cells in order to replace the addition of IL-12 for the activation of NKO cells in vitro assay. These NKO/IL-12 cells were used in vitro test for IL-18 because these NKOIIL-12 cells produced IFN-Y by IL-18 in a dose response manner even in the absence of IL-12. In this study, we have been used the established those cell lines D10S and NKO cells which express a lots of IL-1R and IL-18R, respectively. Those cell lines are being used for the assays of IL-1- or IL-18 modulating factors. Some of those IL-1- or IL-18 modulating factors have been screened and identified. Their efficacy is being evaluated and characterized for their application.


    가. IL-1 receptor 고발현 세포주를 이용한 in vitro 시험법의 확립: specificity, sensitivity. linearity 등 비교 분석: IL-1 receptor type I (IL-1RI)과 IL-1R...

    가. IL-1 receptor 고발현 세포주를 이용한 in vitro 시험법의 확립: specificity, sensitivity. linearity 등 비교 분석: IL-1 receptor type I (IL-1RI)과 IL-1R accessory protein (IL-1RAcp)고 발현 D10S 세포주의 클로닝 및 유지, 이를 이용한 IL-1의 활성 검정 시험법의 확립
    나. NK cells에서 IL-18 receptor 발현을 증가시키는 조건 확립: IL-12의 처리 조건 확립
    다. 분자생물학적, 생화학적 기술을 이용하여 IL-12p40 발현 벡터 제조 및 개량
    라. IL-12p40 발현 세포주 제조
    마. IL-18 receptor 발현하는 NK cells에 IL-12p40을 transfection시켜 IL-18의 활성 검정 시험법 확립
    바. IL-18R/IL-12p40 발현 NK 세포주를 이용한 IL-18의 활성 검정 시험법 확립
    사. IL-1R 고발현 세포주을 이용한 이들 인자들을 억제하거나 조절하는 물질의 효능 검정: IL-1 (or ICE)-like factor 혹은 IL-1-modulating agents의 효능 검정
    아. IL-18R 고발현 NK세포주를 이용한 이들 인자들을 억제하거나 조절하는 물질의 효능 검정 : IL-18-like factor의 탐색 및 효능 검정


  • 목차(Contents) 

    1. 표지 ...1
    2. 용역연구개발사업 최종보고서 ...3
    3. 제출문 ...5
    4. 요약문 ...6
    5. SUMMARY ...10
    6. 목차 ...11
    7. 제1장 서론 ...12
    8. 1. 기술적 측면 ...14
    9. 2. 경제.산업적 측면 ...14
    10. 제2장 국내외 기...
    1. 표지 ...1
    2. 용역연구개발사업 최종보고서 ...3
    3. 제출문 ...5
    4. 요약문 ...6
    5. SUMMARY ...10
    6. 목차 ...11
    7. 제1장 서론 ...12
    8. 1. 기술적 측면 ...14
    9. 2. 경제.산업적 측면 ...14
    10. 제2장 국내외 기술개발 현황 ...16
    11. 1. 국외연구동향 ...16
    12. 2. 국내연구동향 ...16
    13. 제3장 연구개발수행 내용 및 결과 ...18
    14. 1. IL- 1 receptor 고 발현 세포주의 확립·유지, 이를 이용한 IL-l 의 in vitro 활성 검정 시험법 확립 비교분석 specificity, sensitivity 등 비교분석완료; IL-l 조절인자 탐색 및 효능 검정에 이용 중...18
    15. 2. IL-I2 발현 세포주 제조 및 이를 이용한 IL-18 효능 검정 시험법 확립...19
    16. 3. IL-18 의 활성 검정 시험법 확립...23
    17. 4. IL- 1R 고발현 세포주을 이용한 IL-1 조절 물질의 효능 검정...27
    18. 5. IL-18 receptor 고발현 세포주을 이용한 IL-18 조절 물질의 탐색 및 효능 검정...32
    19. 6. IL-l 의 In VIVO 활성 검사 시험...34
    20. 제4장 연구개발목표 달성도 및 대외기여도 ...37
    21. 제5장 연구개발결과의 활용성과 및 계획 ...38
    22. 1. 계량적 성과 ...38
    23. 2. 성과내용기술 ...38
    24. 3. 활용계획 ...39
    25. 제6장 기타 중요변경사항 ...39
    26. 제7장 참고문헌 ...40
    27. 연구과제(세부과제) 요약서...43
  • 참고문헌

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