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보고서 상세정보

생명공학기술을 이용한 장티푸스 백신의 품질평가에 관한 기반 연구(lll)
Studies on assessment of the efficacy of typhoid fever vaccine with biotechnical methods

  • 주관연구기관

    서울대학교
    Seoul National University

  • 연구책임자

    박재학

  • 보고서유형

    최종보고서

  • 발행국가

    대한민국

  • 언어

    한국어

  • 발행년월

    2004-11

  • 주관부처

    식품의약품안전청

  • 사업 관리 기관

    식품의약품안전청
    Korea Food & Drug Administration

  • 등록번호

    TRKO201000016354

  • 키워드

    장티푸스백신.세포성.체액성.점막성 면역.Typhoid vaccine.humoral.cellular.mucosal immunity.

  • DB 구축일자

    2013-04-18

  • 초록 


    This study was performed to provide the guideline for evaluating efficacy of recombinant Salmonella live vaccine. We examined the...

    This study was performed to provide the guideline for evaluating efficacy of recombinant Salmonella live vaccine. We examined the efficacy of a typhoid vaccine produced by attenuated Salmonella typhi strain(LF1011,1021,1035-1038,1047). $LD_{50}$ of challenging organism (S. typhi Ty2) was 10 CFU/mouse, showing this organism was suitable to use in efficacy test. Mouse administered with $10^{9}$ CFU of LF1021, 1035-1036 intranasally can protective effect to $10^{3}$ CFU of S. typhi Ty2. Especillay LF 1037 strain showed strong protectibe effect to $10^{3}$ and $10^{5}$CFU of S. typhi Ty2.
    Among seven attenuated salmonella vaccines, the efficacy of LF 1021(phoP mutant), LF1036(rpoS mutant) and LF 1037(phoP and rpoS double mutant) was more exllent than the others. Moreover the toxicity of these strains were more weaker. Immunomodulating effect of LF1021, LF1036, LF1037 and S. typhi Ty2 was evaluated in vivo mouse model. Five each mouse was intranasally administered with $10^{9}$ CFU of LF1021, LF1036, LF1037 and S. typhi Ty2 was used as control. Five mice of each group were necropsied at 26 days after infection, respectively. On ELISA and RT-PCR using serum and spleen tissue, expression of immunoglobulins and cytokines was measured. The expression of CD4+ and CD8+ T lymphocyte in spleens of mice were evaluated by flowcytometry. Methods used in this study was recommended as a standard for evaluating efficacy of recombinant attenuated live salmonella vaccine immunized via nasal route.


    본 연구는 최근에 전 세계적으로 개발에 박차를 가하고 있는 recombinant salmonella 생균 백신에 대한 효력을 평가할 수 있는 기준을 정하는 것이 목적이다. 2002, 2003 과제에서는 유전자조작을 통한 약독화 백신...

    본 연구는 최근에 전 세계적으로 개발에 박차를 가하고 있는 recombinant salmonella 생균 백신에 대한 효력을 평가할 수 있는 기준을 정하는 것이 목적이다. 2002, 2003 과제에서는 유전자조작을 통한 약독화 백신을 비강 접종 후 세포성, 체액성, 점액성 면역의 변화 양상과 동시에 체내, 체외에서 면역양상의 변화를 조사하여 백신이 임상적 사용에 적합한지를 평가하였다. 백신으로는 Gene deletion의 방법을 이용하여 S. typhi Ty2의 single, double, triple mutant들을 사용하였으며, 변이주를 제작한 후 균주 자체의 독성평가와 효력 평가를 통하여 LF 1021(phoP mutant), LF 1036(rpoS mutant), LF 1037(phoP and rpoS double mutant)가 장티푸스에 대한 백신 후보군으로써 가능성이 있음을 확인하 였다. 백신에 대한 평가를 하는 방법에 있어서, S. Typhi에 대한 면역원성을 마우스에서 평가할 수 있는 비강접종 방식을 사용하여 점막 면역과 세포성/ 체액성 면역원성의 변화를 평가하였다. 또한, 전신면역의 평가에 있어서 ELISA법을 이용하여 혈액 내 IgM, IgA 와 IgG의 subclass의 역가를 평가하였으며, 점막면역의 평가는 장내 IgA의 역가를 ELISA법으로 평가하였다. 이 외에, 면역에 관계하는 cytokine들의 변화양상을 RT-PCR을 통하여 관찰하였는데, 백신을 접종한 마우스의 비장에서 림프구를 분리한 후 RNA를 추출하고 cDNA를 합성하여 IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, IFN-γ, IL-12(p40)에 대한 mRNA의 발현 정도를 평가하였다. 또한 유세포 분석을 통해 비장세포에서 CD4(체액성 면역 MHC class Ⅱ에 관여), CD8(세포성 면역 MHC class Ⅰ에 관여)에 대하여 Flowcytometry를 시행하여 세포성 면역과 체액성 면역의 변화양상을 관찰하였고, proliferation assay를 통해 T림프구유래의 면역인지 B림프구 유래의 면역인지에 대한 평가를 수행하였다. 이런 일련의 시험과정을 통하여 백신 특히, 유전자조작을 통한 약독화 백신을 비강 접종 후 세포성, 체액성, 점액성 면역의 변화 양상과 동시에 체내, 체외에서 면역양상의 변화를 조사하여 백신이 임상적 사용에 적합한지를 평가 하였는데, 이를 통하여 국내 장티푸스백신에 대한 평가를 위한 지표들을 제시한다.


  • 목차(Contents) 

    1. 용역연구개발사업 연구결과보고서 ...1
    2. 표지 ...2
    3. 제출문 ...4
    4. 요약문 ...5
    5. Summary...6
    6. 목차 ...7
    7. 제1장 서론 ...8
    8. 1절 Typhoid fever ...8
    9. 제2장 Typhoid vaccines ...10...
    1. 용역연구개발사업 연구결과보고서 ...1
    2. 표지 ...2
    3. 제출문 ...4
    4. 요약문 ...5
    5. Summary...6
    6. 목차 ...7
    7. 제1장 서론 ...8
    8. 1절 Typhoid fever ...8
    9. 제2장 Typhoid vaccines ...10
    10. 1절 장티푸스 백신 개발의 변천 과정 ...11
    11. 2절 Salmonella strain을 이용한 백신 개발 추세 ...14
    12. 제3장 연구개발수행 내용 및 결과 ...17
    13. 1절 국내외 장티푸스 백신평가 추세 ...17
    14. 2절 재조합 약독화백신의 효력평가에 대한 분석 ...22
    15. 3절 다가 항원을 발현하는 살모넬라 백신 균주의 개발 ...34
    16. 제4장 연구개발목표 달성도 및 대외기여도 ...40
    17. 가. 기대효과 ...40
    18. 나. 활용방안 ...40
    19. 제5장 연구개발결과의 활용성과 및 계획 ...41
    20. 가. 계량적 성과 ...41
    21. 나. 성과내용기술 ...41
    22. 다. 활용계획 ...41
    23. 제6장 기타 중요변경사항 ...42
    24. 제7장 참고문헌 ...43
    25. 부록 I. 재조합백신 평가에 사용된 시험법에 대한 표준작업지침서(SOP) ...46
    26. 부록 II. 재조합 장티푸스 백신의 품질평가 가이드(안) ...54
  • 참고문헌

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