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보고서 상세정보

폐암환자 암세포내 BLV 오염도 조사
Bovine leukemai virus proviral DNA study in human lung cancer cells

  • 사업명

    식품의약품안전성관리

  • 과제명

    폐암환자 암세포내 BLV 오염도 조사

  • 주관연구기관

    가톨릭대학교
    Catholic University of Korea

  • 연구책임자

    한경자

  • 참여연구자

    최찬   김용구   임지향   김명신   이지안   이형석   안혜정  

  • 보고서유형

    최종보고서

  • 발행국가

    대한민국

  • 언어

    한국어

  • 발행년월

    2003-11

  • 과제시작년도

    2003

  • 주관부처

    식품의약품안전청

  • 사업 관리 기관

    식품의약품안전청
    Korea Food & Drug Administration

  • 등록번호

    TRKO201000016398

  • 과제고유번호

    1470001573

  • 키워드

    우형백혈병바이러스.폐암.중합효소연쇄반응.Bovine Leukemia Virus.lung cancer.PCR.

  • DB 구축일자

    2013-04-18

  • 초록 


    The bovine leukemia virus(BLV), an exogenous retrovirus, is the causative agent of enzootic bovine leucosis. BLV infects and caus...

    The bovine leukemia virus(BLV), an exogenous retrovirus, is the causative agent of enzootic bovine leucosis. BLV infects and causes leukemia in cattle, and epidemiological studies have reported the infectivity and oncogenicity for humans. According to study in the United States of America or Canada, more than 20% of cattle have antibodies to this virus and is known as that infected cows are mingled with non-infected cows more than 70% of herd of cattle. Also, it was known that the workers who handle meat in food store have a risk of lung cancer more than normal control. In Korea, a lot of meats are imported from these countries, but there have been no concern about BLV itself and their genetic studies. Lung cancer dominates first of whole cancer in the mortality in Korea. Increased consumption of imported meat contaminated with BLV could be a reason of this increment of lung cancer incidence in Korea. In this study, we studied BLV proviral DNA prevalence rate in lung cancer cells from Korean lung cancer patients as a baseline study of BLV.
    Positive control cell line infected with BLV was BL-3.1(bovine leukemia cell line, CRL-2306) and negative control cell line was BL-3 (bovine leukemia cell line, CRL-8037), both were purchased from ATCC in U.S.A. Total 162 cases of lung cancer patients, 139 of adenocarcinoma, 23 cases of squamous cell carcinoma diagnosed in St. Mary’s Hospital in Korea were included in this study. The primers used for PCR of BLVgene were referenced to article of J. Kuzmark, and designed to 9 segments with different size based on envelope gene (GenBank AY078387) of BLV. PCR was performed using genome DNA of extracted BLV infected cell line as a template, and combinations of 2-3 primers were done to select the best. Sequencing of the PCR product revealed well matched result with BLV envelope gene.
    All 138 human lung cancer specimens revealed negative results for BLV infection.
    In conclusion, BLV is not a causative organism of lung cancer in Korea.


    폐암 환자 162예의 페엽 절제술 수술표본을 확보하여 연구 대상으로 하였다. 이들을 형태학적인 관찰과 면역 조직화학 염색, 필요시 유세포 분석에 의한 DNA함량 분석으로 세부 분류를 하였다. 139예의 adenocarcinoma와 ...

    폐암 환자 162예의 페엽 절제술 수술표본을 확보하여 연구 대상으로 하였다. 이들을 형태학적인 관찰과 면역 조직화학 염색, 필요시 유세포 분석에 의한 DNA함량 분석으로 세부 분류를 하였다. 139예의 adenocarcinoma와 23 예의 squamous cell carcinoma 폐암 조직을 이용하여 고분자 DNA를 추출하였는데 138예에서 성공적으로 분리되었다. Genomic DNA가 현재 paraffin block내에서 조직이 오랫동안 보관되어 있으면서 DNA가 Degradation되어 size가 큰 PCR product들은 증폭이 되지못하였다. 이것은 human genome에서 증폭이 잘되는 primer로 확인을 하였다. 추출된 DNA가 PCR이 가능한지 확인하기 위해 human genomic DNA에 binding가능한 primer를 이용해 PCR을 수행하였다. PCR size는 240bp정도이며 PCR 총 Volume은 25ul이며 pre-mix는 2x buffer 12.5ul, 10mM dNTP(u)은0.5ul, Primer set(each 10p)는1.0ul, Enzyme mix (SolGent,korea)은 0.8ul, Template는1.0(1ng/ul)ul, 9.2ul의 DW를 혼합한 후 사용하였으며, PCR조건은 50도에서 3분, 95도에서 2분동안 1회 pre-denaturation한 후 95도에서 20초, 60도에서 40초, 72도에서 1분동안 40회 증폭한 후 72도에서 3분동안 1회 Post-extension을 하였다. DNA문제로 인해 PCR이 안되는 sample은 다시 Paraffin 절편에서 DNA를 추출하여 실험을 수행하였다. Bovine Leukemia Virus 양성 대조군과 음성 대조군은 ATCC cell line을 구입하여 사용하였다. 모든 대상 증례의 폐암 조직과 양성, 음성 세포주에서 Bovine Leukemia Virus 염기서열을 이용한 Polymerase chain reaction(PCR)을 시행하여 해당 band의 존재 여부를 확인하였다. Bovine Leukemia Virus 염기서열을 이용한 PCR은 기종 소의 세포를 이용한 연구에서 사용했던 primer 염기서열을 이용하여 primer를 합성하여 시행하였다. 기타 PCR에 필요한 효소, master mix등은 상품화된 kit를 이용하였다. PCR 증폭 유무를 확인하기 위하여 Positive control BL-3.1 cell line의 genomic DNA 를 이용하였고 Negative control로는 BL-3 cell line의 genomic DNA를 Template로 이용하여 PCR 증폭 유무를 확인하였다. 증폭 효율이 좋은 Primer를 선별하기 위하여 BL-3.1 genomic DNA를 template로 하여 2-3의 Primer 조합을 이용, PCR을 수행하였다. PCR product sequencing과 BLAST검색결과 BLV envelope gene임을 확인하였다. 상기 서술한 조건을 토대로 폐암 조직으로부터 분리한 DNA를 이용하여 BLV-2의 primer조합으로 PCR을 수행하였다.


  • 목차(Contents) 

    1. 용역연구개발사 업최종보고서...1
    2. 제출문 ...3
    3. 요약문 ...4
    4. SUMMARY ...6
    5. 목차 ...7
    6. 제1장 서론 ...8
    7. 제2장 국내외 기술개발 현황 ...9
    8. 제3장 연구 개발 수행 내용 및 결과 ...10
    9. 가. 연구방법 ...10...
    1. 용역연구개발사 업최종보고서...1
    2. 제출문 ...3
    3. 요약문 ...4
    4. SUMMARY ...6
    5. 목차 ...7
    6. 제1장 서론 ...8
    7. 제2장 국내외 기술개발 현황 ...9
    8. 제3장 연구 개발 수행 내용 및 결과 ...10
    9. 가. 연구방법 ...10
    10. 나. 연구 내용 ...13
    11. 다. 연구 결과 ...14
    12. 제4장 연구개발목표 달성도 및 대외 기여도 ...16
    13. 가. 연구 목표 달성도 ...16
    14. 나. 대외기여도 ...16
    15. 제5장 연구개발결과의 활용성과 및 계획 ...17
    16. 가. 계량적 성과 ...17
    17. 나. 성과내용기술 ...17
    18. 다. 활용계획 ...17
    19. 제6장 기타 중요변경사항 ...18
    20. 제7장 참고문헌 ...19
    21. 연구 과제 요약 ...20
  • 참고문헌

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