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보고서 상세정보

Cytokine의 in vitro 대체 시험법 확립 (III)
Establishment of in vitro cytokine assay-III

  • 사업명

    식품의약품안전성관리

  • 과제명

    싸이토카인의 in vitro 역가시험법 확립

  • 주관연구기관

    한국생명공학연구원
    Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology

  • 연구책임자

    윤도영

  • 참여연구자

    이희구   조민철   심정현   이경애   이해숙   백태웅  

  • 보고서유형

    최종보고서

  • 발행국가

    대한민국

  • 언어

    한국어

  • 발행년월

    2003-12

  • 과제시작년도

    2003

  • 주관부처

    식품의약품안전청

  • 사업 관리 기관

    식품의약품안전청
    Korea Food & Drug Administration

  • 등록번호

    TRKO201000016458

  • 과제고유번호

    1470000512

  • 키워드

    사이토카인.인터루킨-1.인터루킨-18.in vitro 대체 시험법.Cytokine.IL-1.IL-18.in vitro assay.

  • DB 구축일자

    2013-04-18

  • 초록 


    This study was focused on the establishment of in vitro assays for the biologically active cytokines such as IL-1 and IL-18, whic...

    This study was focused on the establishment of in vitro assays for the biologically active cytokines such as IL-1 and IL-18, which enhance or recover the reduced immune responses of patients administered with anticancer drugs. IL-1 and IL-18 are being used as immunomodulating agents. In vivo assays for these biological response modifiers are time-consuming and expensive due to animal experiment, and inaccurate depending on animals. In order to replace in vivo test, Th2 helper cell line D10S, a subclone of Type 2 (Th2) D10G4.1, which responds and proliferates by only IL-1 even in the absence of co-mitogen, has been used. D10S cells expressing lots of IL-1R type I (IL-1RI) and IL-1R accessory protein (IL-1RAcP) were cloned and maintained. D10S cells proliferate by treatment of minimal concentration of IL-1β (2.5 + 0.5 pg/ml) in the absence of co-mitogen. In addition, in order to establish in vitro test for bioactive IL-18, NK0, a subclone of natural killer (NK) cells, has been used. The surface IL-18 receptor on NK0 cells were increased by IL-12 and NK0 cells produced IFN-γ by IL-18 coincubated with IL-12. Mammalian expression pcDNA3.1 vector or pLXN retroviral vector were used for the expression of IL-12p40 (pcDNA3.1/IL-12p40, pLXN/IL-12p40). Those expression vectors were transfected into NK0 cells in order to replace the addition of IL-12 for the activation of NK0 cells in vitro assay. These NK0/IL-12 cells were used in vitro test for IL-18 because these NK0/IL-12 cells produced IFN-γ by IL-18 in a dose response manner even in the absence of IL-12. In this study, we have used those established cell lines D10S and NK0 cells, which express lots of IL-1R and IL-18R, respectively. Those cell lines are being used for the assays of IL-1- or IL-18-modulating factors. Some of those IL-1- or IL-18-modulating factors have been screened and identified. Their efficacy is being evaluated and characterized for their application.


    본 연구에서는 항암 치료 시 체내 면역능이 떨어지는 환자의 면역력을 높여 일종의 면역 기능 조절제로 사용되는 IL-1과 IL-18의 in vitro 생물학적 활성 시험법을 확립하고자 하였다. IL-1 receptor 고 발현 세포주...

    본 연구에서는 항암 치료 시 체내 면역능이 떨어지는 환자의 면역력을 높여 일종의 면역 기능 조절제로 사용되는 IL-1과 IL-18의 in vitro 생물학적 활성 시험법을 확립하고자 하였다. IL-1 receptor 고 발현 세포주인 D10S를 이용하여 in vitro IL-1 활성 시험법을 확립하였고 specificity, sensitivity, linearity 등을 항체를 이용한 IL-1 측정법과 비교 분석하였다. IL-18 또한 receptor 고 발현 세포주인 NK cell을 이용하여 in vitro IL-18 활성 시험법을 확립하였고 항체를 이용한 IL-18 측정 방법과 비교하였다. NK cell은 IL-18 활성을 측정하기 위해서는 IL-12가 함께 첨가되어야 하는데, 지속적이고 안정적으로 IL-18 단독으로 활성을 가지는 IL-12 transfectant를 제조하여 간편한 in vitro IL-18 활성 시험법을 확립하고자 하였다. 이들 시험법은 IL-1과 IL-18의 in vitro 생물학적 활성 시험법의 확립으로 면역 기능조절제로 사용되는 이들 제제의 생물학적 효능 검정에 이용될 수 있고 나아가 이들 사이토카인 조절인자들의 탐색 및 효능 검정에 이용될 수 있다. 또한 항암 치료 시 체내 면역 능 저하 현상 등, 미미한 사이토카인 변화량을 확인하기 위한 이들 사이토카인의 초정밀 진단 방법으로 PCR/ELISA 방법을 확립하였다. 이는 인체의 각종 염증 및 면역 반응에 관련된 이들 인자들의 측정에 활용 가능할 것이다.


  • 목차(Contents) 

    1. 용역연구개발사업 최종보고서 ...1
    2. 표지 ...2
    3. 제출문 ...4
    4. 요약문 ...5
    5. Summary ...6
    6. 목차 ...7
    7. 제1장 서론 ...8
    8. 1. 기술적 측면 ...10
    9. 2. 경제.산업적 측면 ...10
    10. 제2장 국내.외 기술개...
    1. 용역연구개발사업 최종보고서 ...1
    2. 표지 ...2
    3. 제출문 ...4
    4. 요약문 ...5
    5. Summary ...6
    6. 목차 ...7
    7. 제1장 서론 ...8
    8. 1. 기술적 측면 ...10
    9. 2. 경제.산업적 측면 ...10
    10. 제2장 국내.외 기술개발 현황 ...12
    11. 1. 국외 연구 동향 ...12
    12. 2. 국내 연구 동향 ...12
    13. 제3장 연구 개발 수행 내용 및 결과 ...13
    14. 1. IL-1 및 IL-18의 in vitro 시험법의 확립 ...13
    15. 2. IL-12 발현 세포주 제조 및 안정된 세포주의 확립 ...21
    16. 3. IL-1R 및 IL-18R 고 발현 세포 주를 이용한 IL-1 및 IL-18 조절 물질의 효능 검정 ...25
    17. 4. IL-1, IL-18의 in vivo 활성 검사 시험 ...27
    18. 제4장 연구 개발 목표 달성도 및 대외 기여도 ...31
    19. 제5장 연구 개발 결과의 활용 성과 및 계획 ...32
    20. 1. 계량적 성과 ...32
    21. 2. 성과내용기술 ...32
    22. 3. 활용 계획 ...32
    23. 제6장 기타 중요 변경 사항 ...34
    24. 제7장 참고 문헌 ...35
  • 참고문헌

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