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보고서 상세정보

DNA 백신의 약리평가연구
Establishment of DNA vaccine efficacy validation process

  • 사업명

    식품의약품안전성관리

  • 과제명

    DNA 백신의 약리평가연구

  • 주관연구기관

    성균관대학교
    SungKyunKwan University

  • 연구책임자

    양주성

  • 참여연구자

    강혜란   송규호   서강영   이동욱   곽순화   김영환  

  • 보고서유형

    최종보고서

  • 발행국가

    대한민국

  • 언어

    한국어

  • 발행년월

    2003-11

  • 과제시작년도

    2003

  • 주관부처

    식품의약품안전청

  • 사업 관리 기관

    식품의약품안전청
    Korea Food & Drug Administration

  • 등록번호

    TRKO201000016502

  • 과제고유번호

    1470001558

  • 키워드

    약리평가.HPV.DNA vaccine.Evaluation of efficacy.

  • DB 구축일자

    2013-04-18

  • 초록 


    In foreign countries as well as domestic, one of the advanced modern medicine, DNA vaccine is developed and about to be used for ...

    In foreign countries as well as domestic, one of the advanced modern medicine, DNA vaccine is developed and about to be used for clinical trials. Since our country does not have technologies for evaluation, validation for the efficacy of prophylactic and therapeutic DNA vaccine, establishment of DNA vaccine efficacy validation process is highly demanded. For this purpose, proper candidates for antigenic genes as preventive and therapeutic DNA vaccine must be selected. Well characterized human papillomavirus (HPV) was chosen for this research. Specific aim of this research is to develop experimental tools for evaluation of efficacy and safety. This proposal consists of two parts. Finished or experiments in progress are following. 1). Development of HPV 16 antigenic protein expressing genes (E2, E5, E6, E7, L1 and L2) 2). Establishment for evaluation of a protein in vit개 culture (such as immunofluorescence assay-IFA) 3). Evaluation of a protein expression in vivo animal model 4). Efficacy test for immunological responses in vivo animal model 5). Prediction and selection of HPV 16 antigenic epitopes (E2, E5, E6, E7, L1 and L2) First, Cervical cancer causing virus, HPV 16 antigenic genes were cloned and confirmed by sequencing. Second, an antigenic protein expression was analyzed in vitro tissue culture system and this suggests IFA is convenient method to detect a protein expression. Third, to evaluate the immunologic efficacy of antigenic genes, DNA was immunized intramuscularly and bled 2 weeks period and antigen-specific humoral immune response will be evaluated soon. Forth, for the antibody-enzyme linked immunosorvent assay (ELISA) or cell-mediated immune responses. some purified proteins or antigenic peptides are required. The amino acid secondary sequences were analyzed on HPV 16 open reading frames (E2, E5, E6, E7, L1 and L2) and antigenic epitopes were predicted on the basis of antigenic determinant and positivity of surface probability. From this research proposal, establishment for evaluation methodology of neo-biomolecules, for the guidelines of efficacy evaluation, development for the standards to perform efficacy evaluation will be performed. Therefore, the result will be useful for development and evaluation of efficacy.


    국외 뿐만 아니라 국내에서도 전반적인 현대 의학분야에서의 최첨단 분야중의 하나인 DNA vaccine 개발이 급속도로 발전하고 있다. 인간 및 동물질병의 예방책으로서 현재 개발되어지고 있는 DNA vaccine의 유효성 및 안정성 ...

    국외 뿐만 아니라 국내에서도 전반적인 현대 의학분야에서의 최첨단 분야중의 하나인 DNA vaccine 개발이 급속도로 발전하고 있다. 인간 및 동물질병의 예방책으로서 현재 개발되어지고 있는 DNA vaccine의 유효성 및 안정성 평가를 위한 기반기술의 확립이 되어있지 않은 우리나라에서는 이들 바이오 제품중의 하나인 DNA vaccine의 유효성 평가를 위한 기반기술확보를 위한 연구가 시급한 실정이다. 이 연구의 목적을 위해 예방용 및 치료용 DNA vaccine으로 사용될 유전자선정이 필요했으며, 예방 및 치료 효과가 검증된 사람파필로마바이러스 유전자를 이 연구수행의 DNA vaccine으로 사용하였다. 본 연구의 목적은 개발되어진 DNA vaccine의 유효성 및 안정성 평가를 위한 실험방법 개발에 있으며, 연구수행상 [1, 2단계]로 나누어 실험계획을 수립하였으며, 1차년도에 [1단계] 연구내용을 수행 하였다. 수행 완료된 연구내용 및 현재 연구종료시간까지 진행 중인 연구내용은 1). 자궁경부암 원인균인 HPV16의 항원 단백질 발현 유전자 개발 (E2, E5, E6, E7, L1, L2) 2). 세포배양 실험을 통한 단백질 발현 입증법 수립 (Immunofluorescence assay) 3). 동물실험을 통해 in vivo 상에서의 단백질 발현 입증 4). 동물실험을 통한 면역학적 효율성 검증 (항체면역반응) 5). HPV 16 항원 (E2, E5, E6, E7, L1, L2) 특이 epitope 추정 및 선정 등을 포함한다. 첫째, 한국 부인암의 큰 부분을 차지하는 자궁경부암을 일으키는 사람 파필로마바이러스 (Human Papillomavirus) 의 구조 단백질 캡시드 (L1 과 L2)와 비구조단백질 E2, E5, E6, E7 을 항원유전자로서 획득하였으며, 둘째, Indirect Immunofluorescence Assay (IFA)를 통해 clone된 항원유전자들의 발현을 실험 배양세포에서 입증하였으며, 이는 IFA가 단백질 발현을 검증하는 편리한 실험방법임을 제시하였다. 셋째, DNA vaccines의 면역학적 측면에서의 효율성을 검증하기 위하여 항원 유전자를 실험동물근육에 주사하고, 계속 주기적으로 boosting 하고 나서, 실험동물의 serum을 채취하여 항원 특이한 항체반응이 나타나는지를 IgG ELISA를 통하여 곧 검증할 것이다. 넷째, 항원특이의 항체면역반응 검증 및 세포면역반응 검증 역시 정제된 항원 단백질 혹은 peptide가 필요하다. HPV 16 항원 (E2, E5, E6, E7, L1, L2) 각각의 amino acid 배열 2차 구조로부터 단백질의 표면에 노출될 확률과 항원성이 높은 부위를 추정하여 항원성 epitope을 선정하였다.
    본 연구의 수행을 통하여 신종 바이오 제품의 품질 검증 기술을 확립하고, 바이오제품의 유효성 평가 기준을 확립하고, 바이오제품의 유효성 평가를 위한 기준품을 개발한다. 따라서 DNA vaccine 개발 및 평가에 유용한 유효성 평가지표로 활용될 수 있다.


  • 목차(Contents) 

    1. 제출문 ... 1
    2. 요약문 ... 2
    3. Summary ... 3
    4. 목차 ... 3
    5. 제1장 서론 ... 4
    6. 1절 연구의 목적 ... 4
    7. 제2장 국내.외 기술개발 현황 ... 6
    8. 제3장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 8...
    1. 제출문 ... 1
    2. 요약문 ... 2
    3. Summary ... 3
    4. 목차 ... 3
    5. 제1장 서론 ... 4
    6. 1절 연구의 목적 ... 4
    7. 제2장 국내.외 기술개발 현황 ... 6
    8. 제3장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 8
    9. 1절 연구내용 ... 8
    10. 2절 연구방법 ... 12
    11. 3절 연구결과 ... 16
    12. 제4장 연구개발목표 달성도 및 대외기여도 ... 23
    13. 1절 1단계 연구목표 및 달성도 ... 23
    14. 2절 기여도 ... 23
    15. 제5장 연구개발결과의 활용성솨 및 계획 ... 24
    16. 가. 계량적 성과 ... 24
    17. 나. 성과내용기술 ... 24
    18. 다. 활용계획 ... 24
    19. 제6장 기타 중요변경사항 ... 25
    20. 제7장 참고문헌 ... 26
  • 참고문헌

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