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보고서 상세정보

유전자재조합의약품 생산세포주의 유전자 안전성 평가 연구
Characterization of cell substrate used in the rDNA derived products

  • 사업명

    식품의약품안전성관리

  • 과제명

    유전자재조합의약품 생산세포주의 유전적 안정성 평가 연구

  • 주관연구기관

    (주)녹십자
    Greencross Central Research Institute

  • 연구책임자

    이용석

  • 참여연구자

    홍광원   신용원   김국희  

  • 보고서유형

    최종보고서

  • 발행국가

    대한민국

  • 언어

    한국어

  • 발행년월

    2004-01

  • 과제시작년도

    2003

  • 주관부처

    식품의약품안전청

  • 사업 관리 기관

    식품의약품안전청
    Korea Food & Drug Administration

  • 등록번호

    TRKO201000016509

  • 과제고유번호

    1470000130

  • 키워드

    유전자재조합의약품.유전자 안정성.세포기질.가이드라인.recombinant.genetic stability.CHO cell.cell substrate.guideline.

  • DB 구축일자

    2013-04-18

  • 초록 


    It has been tried to provide the applied examples and standard operating procedures of genetic stability tests for the CHO cell w...

    It has been tried to provide the applied examples and standard operating procedures of genetic stability tests for the CHO cell which expresses recombinant-DNA derived pharmaceuticals based on ICH (International Committee of Harmonization) Guideline Q5B. The evaluation and stability of cell substrate in the production of cells for the manufacturing of recombinant-DNA derived pharmaceuticals, and the review of genetic stability at DNA and RNA levels are very important factors as well as good manufactured products.
    And systematic control of the cell which expresses recombinant-DNA derived pharmaceuticals is required during the manufacturing as well as after then.
    Therefore, we would like to suggest the systematic control model of genetic stability of the cell for manufacturing of recombinant-DNA derived pharmaceuticals in this project.
    Tests for viability and cell growth kinetics were carried out firstly except morphological analysis and inviral test which overlapped with other projects.
    The sequence analysis, genetic type test by restriction mapping, copy number test, RT-PCR test, northern blot were conducted at DNA and RNA levels.
    Finally, productivity and western blot were tested at protein level. The tests include more detail information at protein level in comparison with stability test of product.
    The study on other various tests including amino-acid sequence analysis, peptide mapping and glycosylation test will be conducted in the next project to study product stability. Assurance of genetic stability of cell substrate affects the quality, stability and productivity of biotech pharmaceuticals fundamentally.
    We wish that this result will be a guide to help the Korean industry develop biotech pharmaceuticals efficiently.


    ICH(International Committee on Harmonization)의 Guideline(Q5B: Genetic stability)에 근거하여 유전자 재조합 의약품을 발현하는 CHO cell에서의 유전적 안정성의 시험 ...

    ICH(International Committee on Harmonization)의 Guideline(Q5B: Genetic stability)에 근거하여 유전자 재조합 의약품을 발현하는 CHO cell에서의 유전적 안정성의 시험 항목의 적용 사례와 그 시험의 SOP를 제공하고자 하였다.
    유전자 재조합 생산용 세포의 제조에 있어서 세포의 기질 평가 및 안정성, DNA level 및 RNA, protein level에서의 유전자 안정성의 검토는 올바른 생산품의 생산과 함께 생산성에 아주 중요한 인자이며, 유전자 재조합 의약품을 생산하는 세포주는 그 제조과정과 제조 후 관리에서 체계적인 관리가 필요하다. 따라서 이 과제에서는 유전자 재조합 의약품의 생산용 세포주의 체계적인 유전자 안정성 모델을 제시하고자 한다.
    먼저 세포의 단계에서는 다른 과제와 겹치는 Morphological analysis나 imviral test를 제외한 viability test 시험과 cell growth kinetics 시험을 실시하였다.
    그리고 DNA와 RNA의 단계에서는 염기서열분석, Restriction mapping에 의한 유전형질확인시험, copy number 확인시험, RT-PCR 시험, Northern blot 시험을 실시하였다.
    마지막으로 protein 단계에서는 productivity 시험과 western blot 시험을 실시하였다. Protein level에서의 시험은 제품의 안정성 시험에서 보다 자세히 이루어진다. 아미노산서열확인시험이나 peptide Mapping, glycosylation 확인 시험 등 다양한 시험항목은 차후 제품의 안정성 과제에서 실시하고자한다.
    세포기질의 유전적 안정성의 확보는 의약품 생산에서 생명공학 의약품의 품질 및 안정성, 그리고 생산성에 근본적인 영향을 미친다. 이 과제에서는 국제적 기준에 맞는 시험법을 생명공학의약품 개발기관에 제공함으로서 보다 효율적인 제품개발에 도움이 되기를 바란다.


  • 목차(Contents) 

    1. 최종보고서 ...1
    2. 제출문 ...2
    3. 요약문 ...2
    4. Project Summary ...4
    5. 목차 ...5
    6. List of Table ...6
    7. List of Figure ...6
    8. 제1장 서론 ...6
    9. 제2장 국내.외 기술개발 현황 ...7...
    1. 최종보고서 ...1
    2. 제출문 ...2
    3. 요약문 ...2
    4. Project Summary ...4
    5. 목차 ...5
    6. List of Table ...6
    7. List of Figure ...6
    8. 제1장 서론 ...6
    9. 제2장 국내.외 기술개발 현황 ...7
    10. 제3장 연구개발수행 내용 및 결과 ...7
    11. 제1절 EPO 생산 세포주의 유래 및 제조 ...8
    12. 1. 숙주 세포주(rhEPO-CHO)의 기원 및 유래 ...8
    13. 2. EPO생산 마스터 세포주의 제조(단일 세포에서 Cell Bank 제조) ...10
    14. 제2절 유전자 안정성 평가 연구 ...13
    15. 1. 염기서열 분석법 ...14
    16. 2. Restriction Mapping에 의한 유전형질확인 시험법 ...19
    17. 3. Copy number 확인 시험법 ...27
    18. 4. RT-PCR 시험법 ...38
    19. 5. Northern blot 시험법 ...44
    20. 6. Cell growth kinetics 시험법 ...50
    21. 7. Viability test 시험법 ...55
    22. 8. Productivity 시험법 ...58
    23. 9. Western blot 시험법 ...62
    24. 제3절 결론 및 요약 ...68
    25. 1. 시험항목의 결과 요약 ...68
    26. 2. 발전방향 ...71
    27. 제4장 연구개발목표 달성도 및 대외기여도 ...73
    28. 1. 연구목표 달성도 ...73
    29. 2. 대외기여도 ...74
    30. 제5장 연구개발결과의 활용성과 및 계획 ...75
    31. 1. 계량적 성과 ...75
    32. 2. 성과내용기술 ...75
    33. 3. 활용계획 ...75
    34. 제6장 기타 중요변경사항 ...76
    35. 제7장 참고문헌 ...77
    36. 별첨 1. 유전자재조합 단백질 생산 세포에서 발현체의 유전자안정성 평가 가이드 ...81
  • 참고문헌

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