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보고서 상세정보

미승인 LMO 진단 기술 개발
Development of diagnostic technique for unapproved LMO

  • 사업명

    농림축산검역검사기술개발

  • 과제명

    미승인 LMO 진단기술 개발

  • 주관연구기관

    경희대학교 산학협력단

  • 보고서유형

    최종보고서

  • 발행국가

    대한민국

  • 언어

    한국어

  • 발행년월

    2014-11

  • 과제시작년도

    2014

  • 주관부처

    농림축산식품부
    Ministry of Agriculture, Food and Rural Affairs(MAFRA)

  • 등록번호

    TRKO201600000749

  • 과제고유번호

    1545008959

  • 키워드

    미승인.유전자변형생물체.진단기술.중합효소연쇄반응.Unapproved.LMO.diagnostic technique.PCR.

  • DB 구축일자

    2016-04-30

  • DOI

    https://doi.org/10.23000/TRKO201600000749

  • 초록 


    In this study, we surveyed development status of genetically modified (GM) cotton, common bean, and maize approved for commercial...

    In this study, we surveyed development status of genetically modified (GM) cotton, common bean, and maize approved for commercialization in India, China, and Brazil. GM cotton BNLA-601, Event1, GFM, and MLS-9124 have been developed in India and GM common bean EMBRAPA5.1 has been approved for commercialization in Brazil, and GM cotton (GK12, GK19, SGK321) and GM maize BVLA430101 have been developed in China.
    These GM events have been not approved in Korea yet. Standard reference plasmids were constructed based on the sequences of genes, promoters, terminators, and flanking regions of the unapproved GM events. The standard reference plasmids contained taxon-specific targets as a negative control, and gene- or event-specific targets as s positive control.
    Four duplex PCR detection methods were developed to identify unapproved GM common bean EMBRAPA 5.1, GM cotton (BNLA-601, MLS-9124), and GM maize BVLA430101 and a screening method of GM cotton (SGK321, GK19) targeting cpti and cry1A genes were established in this study.
    The specificity of designed primer sets were by using various GM events for soybean, maize, cotton, and canola. Each target for GM events were specifically confirmed. To test the limit of detection (LOD) of the PCR detection methods, the serially diluted reference molecules (1×100, 1×101, 1×102, 1×103, 1×104, and 1×105copies per reaction) were used as templates. The LODs were approximately 10
    copies, based on the PCR results and confirmed by the Agilent 2100 Bioanalyzer.
    All of the commercialized LMO detection kits were verified at PLUTOS Inc., Animal and Plant Quarantine Agency, and Kyung Hee university to make sure that they are working properly before finalize the commercial production.


    본 연구에서는 인도, 중국, 브라질에서 상업화된 유전자변형 면화, 콩, 옥수수에 대한 개발 실태조사를 실시하였다. 유전자변형 면화(BNLA-601, Event1, GFM, MLS-9124)는 인도에서 개발되었고, 유전자변형 콩(EM...

    본 연구에서는 인도, 중국, 브라질에서 상업화된 유전자변형 면화, 콩, 옥수수에 대한 개발 실태조사를 실시하였다. 유전자변형 면화(BNLA-601, Event1, GFM, MLS-9124)는 인도에서 개발되었고, 유전자변형 콩(EMBRAPA 5.1)은 브라질에서 상업적으로 개발되었으며, 유전자변형 면화(GK12, GK19, SGK321)와 유전자변형 옥수수(BVLA430101)는 중국에서 개발되었다.
    이러한 유전자변형 작물은 우리나라에서 모두 미승인 품목이다. 이러한 미승인 유전자변형 작물에 대한 일부 유전자 및 promoter, terminator, flanking region에 대한 염기서열을 확보하였고, 이것을 기초로 하여 미승인 LMO 검사법에 활용할 표준플라스미드를 개발하였다. 표준플라스미드는 각 작물의 내재유전자를 포함하는 음성대조구와 gene- 또는 event-specific targets에 대한 양성대조구를 포함한다.
    미승인 유전자변형 콩 1종(EMBRAPA 5.1), 미승인 유전자변형 옥수수 1종(BVLA430101), 미승인 유전자변형 면화 2종(BNLA-601, MLS-9124)에 대한 duplex PCR 검사법을 개발하였고, cpti 유전자와 cry1A 유전자를 포함하는 미승인 유전자변형 면화 (GK19, SGK321 등)에 대한 스크리닝 검사법을 개발하였다. 이러한 검사법에 사용한 각각의 primer sets는 유전자변형 콩, 옥수수, 면화, 카놀라 등의 다양한 GM events에 대해 특이성을 확인하였다. 개발된 검사법들의 검정한계치를 확인하기 위하여 표준플라스미드를 동일한 copy 수로 혼합하여 1×100, 1×101, 1×102, 1×103, 1×104, 1×105 copies로 준비한 후 PCR을 실시한 결과 모두 검정한계치가 약 10 copies로 확인되었다.
    본 연구에서 개발된 미승인 LMO에 대한 검사법은 모두 kit로 제작되었고, 이들에 대해 3개 기관(농림축산검역본부 식물검역부 위험관리과, 경희대학교, 플루토스사)에서 증실험을 실시하였다. 이러한 미승인 LMO 검사 kit를 이용하여 모든 국경 검역 현장에서 정확하고 간편하게 적용할 수 있을 것으로 판단된다.


  • 목차(Contents) 

    1. 표지 ... 1
    2. 총괄 연구과제 요약 ... 2
    3. 연구결과보고서 요약문 ... 4
    4. Summary ... 5
    5. 제1장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ... 6
    6. 1.1 총괄연구개발과제의 목표 ... 6
    7. 1.2 총괄연구개발과제의 목표달성도 ... 7
    8. 1.3...
    1. 표지 ... 1
    2. 총괄 연구과제 요약 ... 2
    3. 연구결과보고서 요약문 ... 4
    4. Summary ... 5
    5. 제1장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ... 6
    6. 1.1 총괄연구개발과제의 목표 ... 6
    7. 1.2 총괄연구개발과제의 목표달성도 ... 7
    8. 1.3 국내·외 기술개발 현황 ... 7
    9. 제2장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 방법 ... 8
    10. 2.1 인도, 중국, 브라질 등에서 자국내 개발하여 상업화된 미승인 유전자변형 콩, 옥수수, 면화 등의 개발 실태조사 ... 8
    11. 2.2 미승인 유전자변형 작물의 표준시료 및 염기서열 확보 ... 10
    12. 2.3 확보된 미승인 LMO의 염기서열 및 표준시료를 이용하여 지속적으로 검사법에 활용할 수 있도록 positive control로써 표준플라스미드 제작 ... 10
    13. 2.4 확보된 미승인 LMO의 5종에 대한 정성검사법 개발 ... 10
    14. 2.5 개발된 미승인 LMO 검사법의 kit화 ... 11
    15. 제3장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 결과 ... 12
    16. 3.1 인도, 중국, 브라질 등에서 자국내 개발하여 상업화된 미승인 유전자변형 콩, 옥수수, 면화 등의 개발 실태조사 ... 12
    17. 3.2 미승인 유전자변형 작물의 표준시료 및 염기서열 확보 ... 15
    18. 3.3 확보한 미승인 유전자변형 작물에 대해서는 검사법에 활용할positive control로써 standard plasmid 개발 ... 28
    19. 3.4 1차년도에서 확보된 미승인 유전자변형 콩, 옥수수, 면화 등 전체5종에 대한 정성 검사법 개발 ... 31
    20. 3.5 다양한 유전자변형 작물에 대한 primer set의 특이성 확인 ... 35
    21. 3.6 개발된 미승인 유전자변형 작물 검사법의 검정한계치 확인 ... 37
    22. 3.7 개발된 미승인 유전자변형 작물 검사법의 kit화 ... 39
    23. 제4장 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 45
    24. 제5장 총괄연구개발과제의 연구성과 ... 46
    25. 5.1 활용성과 ... 46
    26. 5.2 활용계획 ... 47
    27. 제6장 기타 중요변경사항 ... 47
    28. 제7장 참고문헌 ... 48
    29. 제8장 첨부서류 ... 49
    30. 끝페이지 ... 50
  • 참고문헌

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