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HRHR로 태어난 파킨슨 질환 개의 특성연구
Studies on Parkinson’s disease related dog

  • 과제명

    HRHR로 태어난 파킨슨 질환 개의 특성연구

  • 주관연구기관

    한국과학기술원
    Korea Advanced Institute of Science and Technology

  • 연구책임자

    박찬규

  • 참여연구자

    권규  

  • 보고서유형

    최종보고서

  • 발행국가

    대한민국

  • 언어

    한국어

  • 발행년월

    2016-01

  • 과제시작년도

    2015

  • 주관부처

    미래창조과학부
    KA

  • 사업 관리 기관

    한국과학기술원
    Korea Advanced Institute of Science and Technology

  • 등록번호

    TRKO201600002327

  • 과제고유번호

    1711032184

  • 키워드

    형질전환 동물 모델,파킨슨병,글리옥살,CRISPR/Cas 시스템DJ-1

  • DB 구축일자

    2016-06-04

  • 초록 


    We have identified the function of DJ-1, a Parkinson’s disease related protein whose function was previously unknown, as a novel ...

    We have identified the function of DJ-1, a Parkinson’s disease related protein whose function was previously unknown, as a novel glyoxalase that detoxifies glyoxal. This implies that accumulation of cellular glyoxal is one of the causes of neuronal diseases. In this research, we aim to analyze DJ-1 related to Parkinson’s disease. These degenerative brain disease model dog will illuminate disease-inducing mechanisms and provide possible solutions for the prevention and treatment of diseases.
    We succeeded generation of human DJ-1 (hDJ-1) overexpressed transgenic dog (TG). Canine fetal fibroblast infected by retrovirus containing N-terminal flag tagged hDJ-1 gene was injected in oocyte using somatic cell nuclear transfer (SCNT). Using inverse PCR and qPCR, human DJ-1 copy number and location were determined. We isolated peripheral blood mononuclear cell (PBMC) in blood of controls and TG respectively. We performed western blot for detecting human DJ-1 expression and MG-H1 with lysed PBMCs. MG-H1 was dramatically decreased in TG.
    We have CRISPR/Cas9 system for generating knock-out dog. We constructed vector for sgRNA synthesis and purified the Cas9 protein. Using elecrophoration, Cas9-sgRNA complexes were introduced into canine fetal fibroblasts. Targeted knockout of DJ-1 in those cells were successful.


    1. 파킨슨 질환과 관련된 유전자인 DJ-1과 glyoxals에 관한 모델 동물 연구
    가. 레트로바이러스를 이용해 삽입된 DJ-1 유전자 위치 확인
    나. qPCR을 이용한 삽입된 DJ-1개수 확인
    다. 가계도 분석...

    1. 파킨슨 질환과 관련된 유전자인 DJ-1과 glyoxals에 관한 모델 동물 연구
    가. 레트로바이러스를 이용해 삽입된 DJ-1 유전자 위치 확인
    나. qPCR을 이용한 삽입된 DJ-1개수 확인
    다. 가계도 분석을 통해 정확한 유전 정보 확인
    라. 자손들에게서의 DJ-1 단백질 분석을 통한 germline transfer 확인
    마. Glyoxal에 의해 야기되는 단백질 변형 분석을 통해, DJ-1 에 의한 단백질 변형 감소 확인
    2. CRISPR/Cas9 시스템을 이용한 유전자 절단 기술의 개발 및 적용
    가. S.aureus 의 cas9 유전자 클로닝.
    나. Cas9 및 cas9_GFPuv 단백질 확보
    다. sgRNA-transacting RNA 확보를 위한 벡터 확보
    라. Cas9-sgRNA complex를 이용한 개 체세포에서의 DJ-1 유전자 결손 확인


  • 목차(Contents) 

    1. 표지 ... 1
    2. 제출문 ... 2
    3. 보고서 초록 ... 3
    4. 요약문 ... 4
    5. SUMMARY ... 6
    6. CONTENTS ... 7
    7. 목차 ... 8
    8. 제1장 연구개발과제의 개요 ... 9
    9. 제1절 연구개발의 목적 ... 9
    10. 제2절 연구...
    1. 표지 ... 1
    2. 제출문 ... 2
    3. 보고서 초록 ... 3
    4. 요약문 ... 4
    5. SUMMARY ... 6
    6. CONTENTS ... 7
    7. 목차 ... 8
    8. 제1장 연구개발과제의 개요 ... 9
    9. 제1절 연구개발의 목적 ... 9
    10. 제2절 연구개발의 필요성 ... 9
    11. 제2장 국내외 기술개발 현황 ... 11
    12. 제1절 국내 연구 현황 ... 11
    13. 제2절 국외 연구 현황 ... 11
    14. 제3장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 13
    15. 제1절 사람 DJ-1 과발현 형질전환 개의 특성 연구 ... 13
    16. 제2절 CRISPR/Cas9 시스템을 이용한 파킨슨 관련 유전자 결손 실험 ... 21
    17. 제4장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 24
    18. 제1절 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 24
    19. 제5장 연구개발결과의 활용계획 ... 25
    20. 제1절 사람 DJ-1 과발현 형질전환 개의 특성 연구 ... 25
    21. 제2절 CRISPR/Cas9 시스템을 이용한 파킨슨 관련 유전자 결손 실험 ... 25
    22. 제6장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 26
    23. 제7장 참고문헌 ... 27
    24. 끝페이지 ... 28
  • 참고문헌

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